| 研究課題/領域番号 |
21K02118
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| 研究機関 | 京都女子大学 |
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研究代表者 |
門間 敬子 京都女子大学, 家政学部, 教授 (70397561)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | GRP / 食物アレルギー / CRD / モモ重症アレルゲン / モノクローナル抗体 |
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| 研究実績の概要 |
食物アレルギーは「アレルギー食品」ではなくアレルギーの原因となる「アレルゲン分子（コンポーネント）」を考えることが主流となっている。モモ重症アレルゲンであるGibberellin-regulated protein (GRP) 果物・野菜間で保存性が高く、モモ以外の果物・野菜においてもGRPを原因物質としたアレルギーが報告されている。さらに花粉に含まれるGRPとアレルギーとの関係も重要視されている。
本研究ではすでに取得している複数の抗モモGRPモノクローナル抗体を用いて果物・野菜からのGRPを純化した。モモGRPの他、リンゴ、ブドウ、ウメ、ナシ、イチジク、ジャガイモ、ニンジン、スギ花粉からGRPを精製することができた。これらは患者血清との反応に用いるとともに、熱安定性などタンパク質としての性質の解析に用いる。また交差反応性を利用したELISA解析により、多くの果物・野菜のGRP量を測定した。検量線作成にはモモGRPを用いたため、モモ当量となる。従って実際の値とは異なるが、モモアレルギー患者にとっては有益な情報となる。モモ以外ではウメに非常に多く、バラ科果実であるサクランボでも多くのGRPを検出した。ブドウでは種類による差が大きかった。また赤・黄ピーマンでは未成熟の緑ピーマンに比べてG R P量が増加していた。さらにRT-qPCRによる発現解析をおこない、モモでは成熟に伴いGRP発現量が増加することを明らかにした。また酵母において組替えG R Pを発現し、抗体カラムを用いて精製した。
これらの結果は、果物・野菜重症アレルゲンGRPに対してアレルギーを持つ患者が何をどのくらい食べて良いのかを明らかにすることにつながり、QOLの向上に寄与することが期待できる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
１、モノクローナル抗体の交差反応性を利用して複数の果物・野菜からG R Pを精製することができた。
２、モノクローナル抗体の交差反応性を利用して複数の果物・野菜のG R P量の含有量を測定することができた。
３、RT-qPCRによる発現量解析においても成熟に伴いGRP発現量が多くなることを明らかにした。
４、酵母における組み換えG R P発現系を構築した。
以上のことから、計画はおおむね順調に進んでいると判断している。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度は以下に示した実験を行うことによりGRPの抗原性の解析を進めていく。
１、精製したGRPの熱安定性および食材中での安定性を検討する。
２、RT-qPCRによりモモ以外の果物・野菜においてもGRP発現量を測定する。
３、花粉由来GRPのモノクローナル抗体を作製し、特異的な検出系を構築する。
４、アミノ酸配列よりアレルゲンとなる配列を検討し、部位特異的変異G R Pの作製を試みる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ディープフリーザーを購入するため次年度使用額が生じた
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