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2023 年度 実績報告書

乳酸菌に乳酸を生産させない革新的高密度培養法

研究課題

研究課題/領域番号 21K05372
研究機関関西大学

研究代表者

片倉 啓雄  関西大学, 化学生命工学部, 教授 (50263207)

研究分担者 山崎 思乃  関西大学, 化学生命工学部, 准教授 (50602182)
研究期間 (年度) 2021-04-01 – 2024-03-31
キーワード乳酸菌 / 高密度培養 / 流加培養 / カタボライト抑制 / RNAseq / 好気培養
研究実績の概要

Latoplantibacillus plantarumを好気条件で流加培養したところ、oxidaseなど酸素を電子受容体とするNAD+再生経路の発現が高まっており、副生するH2O2を消去するため、NADH peroxidaseの発現も増加していた。比増殖速度μを様々なレベルに設定してグルコースを流加したところ、μ=0.25 1/h付近で過酸化水素の蓄積が見られた。一方、鉄キレートタンパク質をコードすると推定される遺伝子lp_2113の発現が好気流加培養では顕著に増加していた。鉄イオンが触媒するフェントン反応で過酸化水素からより有害なヒドロキシルラジカルが生じるのを回避していると考えられたので、現在、組換えタンパク質の鉄キレート能を調べるとともに、遺伝子破壊実験で酸素感受性が増すかを検証している。
また、グリセリンのトランスポーター(glpF3)とglycerol kinase (glpK)に加えて、グリセロリン酸からNAD+を使わずに過酸化水素を副生してジヒドロキシアセトンリン酸を生じるα-glycerophosphate oxidase (glpD)が発現していた。酸素障害に備えた上で意図的に過酸化水素を発生させているも考えられ、この仮説を検証している。
L. lactisで好気流加による高密度培養を行ったところ、低いμでは乳酸生産を抑制できるが酢酸の生産が認められた。エネルギー不足を補うためと考えられたので、ヘムを添加して呼吸鎖の形成を促したところ、菌体濃度は19 g-DCW/L (5.6×10^10cfu/mL) まで培養でき、対糖菌体収率は0.42 g-DCW/g-glucose に達した。電気透析などの大掛かりな装置を用いた場合を除けば、これまでの報告で最も高い菌体濃度を達成した。

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2023

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 1件)

  • [雑誌論文] Analysis of the effects of specific growth rate of Lactococcus lactis MG1363 on aerobic metabolism and its application to high-density culture2023

    • 著者名/発表者名
      Ryo Ichinose, Shino Yamasaki-Yashiki and Yoshio Katakura
    • 雑誌名

      Journal of Bioscience and Bioengineering

      巻: 136 ページ: 129-135

    • DOI

      10.1016/j.jbiosc.2023.05.005

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] High cell density culture of lactic acid bacteria by aerobic fed-batch culture2023

    • 著者名/発表者名
      Ryo Ichinose, Daiki Kambara, Takatoshi Nakahara, Shino Yamasaki-Yashiki and Yoshio Katakura
    • 学会等名
      The 13th Asian Conference of Lactic Acid Bacteria
    • 国際学会
  • [学会発表] 好気流加培養による乳酸菌の高密度培養2023

    • 著者名/発表者名
      一瀬涼, 山崎思乃, 片倉啓雄
    • 学会等名
      日本生物工学会第74回大会
  • [学会発表] 好気流加培養における乳酸菌のグリセリン代謝2023

    • 著者名/発表者名
      神原大樹, 林田充基, 山崎思乃, 片倉啓雄
    • 学会等名
      日本乳酸菌学会2023年度大会
  • [学会発表] 好気的流加培養におけるカタラーゼ添加による酸素障害の回避2023

    • 著者名/発表者名
      中原尭駿, 山崎思乃, 片倉啓雄
    • 学会等名
      日本乳酸菌学会2023年度大会

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公開日: 2024-12-25  

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