|
本課題では、定型BSEの起源を明らかにすることを目的に１）プリオンの異種動物間伝達を模した、各種反芻類プリオンをシードとした試験管内増幅法（PMCA）によるプリオン様産物の生成、２）ウシ組換えPrPを基質としたPMCAによる組換えプリオンの自発生成を試みた。本年度はPMCAにより生成した、各種プリオン様プロテアーゼ抵抗性プリオン蛋白質(PrPres)の生化学的性状や感染性の有無等を調べた。
L型・H型BSEおよび定型・非定型スクレイピー、シカ慢性消耗病（CWD)プリオンをシードとし、ヒツジ(TgOv)およびウシ(TgBo)、ヒト(TgHu)正常型プリオン蛋白質（PrP）を発現する形質転換マウス脳乳剤を基質としてそれぞれPMCAを 行った。その結果、H型BSEおよび定型スクレイピー、CWDプリオンをシード、TgOvおよびTgBo、TgHu脳乳剤を基質とした場合、PrPresの生成が認められた。生成したPrPresについて生化学的性状解析およびバイオアッセイを行ったところ、H型BSEプリオンとTgOv脳乳剤の組み合わせ、H型BSEプリオンとTgHu脳乳剤の組み合わせで定型BSE様プリオンの生成が認められた。これらの結果は、H型プリオンは異種動物への伝達および順化の過程で定型BSEプリオン様に性状が変化すると考えられた。
昆虫細胞発現系で産生した組み換えウシPrPを基質としたシード非存在下におけるPMCAでウエスタンブロッティングによるバンドパターンが異なる複数のPrPresが自発生成した。そのうちのひとつのPrPresをTgBoマウスに接種した結果、プリオン病の症状を示し、脳内に異常型PrPの蓄積が認められた。これらの結果はBSEが孤発的に生成する可能性を示しており、定型BSEプリオンも自発生成したことを示唆している。
|
