| 研究課題/領域番号 |
21K06154
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
近藤 久雄 九州大学, 医学研究院, 教授 (20205561)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | ゴルジ体 / 膜融合 / p97 / p47 |
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| 研究実績の概要 |
ゴルジ体は細胞の根幹をなすオルガネラであり、扁平膜が積層した特徴的な形態を示す。申請者は、分裂期でのゴルジ体再構成に必須なp97/p47膜融合経路を発見してきた。膜融合には、Rab蛋白質が関与する係留(tethering)複合体による膜係留が必要であると考えられているが、このp97/p47経路における膜係留は不明のままであった。幸いにこの程我々は、p97/p47経路においては、p97/p47自身が、ゴルジ膜上のFTCDと係留複合体形成し、ゴルジ体膜を係留することを見いだした（EMBO J, 2021）。即ち、p97/p47複合体は、驚くべきことに、膜係留とSNARE primingという二つの機能を一つの膜融合過程で果たしていた。
本年度は、FTCDのゴルジ体膜上の受容体の同定を試みた。ラット肝臓から高度に精製したゴルジ体膜を可溶化して、抗FTCD抗体を用いた免疫沈降により行った。結果、ゴルジ体膜に局在する足場蛋白質であるGM130が同定された。実際、Hela培養細胞を用いた免疫蛍光抗体染色において、FTCDとGM130は強い共局在性をゴルジ体上において示している。また、GM130をミトコンドリア外膜の細胞質側に異所性に発現させた細胞では、内在性FTCDがゴルジ体からミトコンドリアに移動した。さらに、FTCDとGM130のリコンビナント蛋白質を大腸菌から調製し結合実験を行った結果、FTCDとGM130は直接に結合することも明らかとなった。
GM130をミトコンドリア外膜に発現させた細胞では、ミトコンドリア凝集が認められたが、FTCD siRNAにより凝集は解消された。従って、GM130-FTCD-p97/p47-FTCD-GM130という巨大な係留装置が機能していると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
今年度は、新規の膜係留因子FTCDの受容体としてGM130の同定に成功している。さらに、GM130をミトコンドリア外膜に異所性に発現させた細胞系を立ち上げている。この細胞では、ミトコンドリアの凝集が認められ、新規膜係留複合体GM130-FTCD-p97/p47-FTCD-GM130の動態を生細胞で観察することが可能になった。従って、来年度以後は、この細胞系を使ってさらに他の因子の関与をin vivoで検討することが可能になった。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度にGM130をミトコンドリア外膜に異所性に発現させた細胞系を立ち上げている。この細胞では、ミトコンドリアの凝集が認められ、新規膜係留複合体GM130-FTCD-p97/p47-FTCD-GM130の動態を生細胞で観察することが可能になった。来年度以後は、生化学的手法で新規因子を単離すると共に、この細胞系を使って同定した新規因子の機能をin vivoで検討していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナ感染症の世界的流行の影響で、英国Imperial Collegeとの共同研究に関する部分が遅れている。来年度は、その遅れを取り戻すべく、国際共同研究に関するプロジェクトを行うつもりである。
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