細胞接着制御因子Rap1による新たな好中球細胞死制御メカニズムの解明

2023 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21K06181
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 上岡 裕治 関西医科大学, 医学部, 講師 (50511424)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: Netosis / Rap1 / integrin / outside-in / inside-out

研究実績の概要

本研究課題では、当該年度において好中球特異的（LsyM-Cre）可視化マウスの作出を完了した。Ly6GやGr-1といった顆粒球マーカーとも合わせて解析したが、一部で予想外のpopulationが存在することも判明し、興味深い結果となった。しかし、本学の二光子レーザー顕微鏡の故障により予定していたin vivoイメージングを達成できなかった。Rap1シグナルの構成因子の一つ、Mst1を好中球特異的にノックアウトしたマウスの作出を完了し、腹腔内LPS投与による解析を進めた。また前年度より各種ノックアウトマウスの骨髄由来の好中球を精製してin vitro解析を進めていたが、好中球特異的Talin1ノックアウトマウスの骨髄由来細胞ではTalin1のノックアウトが不十分であったため、細胞調整の段階で再検討を要した。パーコール等を用いた遠心分離による一般的な好中球精製（濃縮）では純度が80-90％程度で、実験ごとのブレも大きいことから、磁性粒子と抗体による精製法に切り替え、解析を行った。しかし、in vitroでは細胞調整時の影響を排除することは以前難しい。NETosisの定量的画像評価に関しては再現性やデータ取得方法そのもの、解析方法に課題はあるものの、画像AI解析技術の進歩により報告が近年増えてきた。コマーシャルベースのソフトで既に大量の画像を学習させ、分類させることも可能となってきていた。そこで、より生理的な血管内の血流を模倣した条件下での解析を進めた。インテグリン-Rap1シグナルを解析する上で、好中球よりも所属研究室で研究マテリアルが揃っているT細胞でflowイメージング系を立ち上げ、これまでの成果をCell Reports (2023) Jun 27;42(6):11258に報告した。

備考

関西医科大学　プレスリリース

研究成果

• [国際共同研究] UNC-Chapel Hill(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: UNC-Chapel Hill
• [国際共同研究] Inserm/University of Lille/Institut Pasteur de Lille(フランス)
  • 国名: フランス
  • 外国機関名: Inserm/University of Lille/Institut Pasteur de Lille
• [国際共同研究] Hanoi Medical University/National Children Hospital(ベトナム)
  • 国名: ベトナム
  • 外国機関名: Hanoi Medical University/National Children Hospital
• [雑誌論文] Mouse eosinophil‐associated ribonuclease‐2 exacerbates the allergic response (2024)
  • 著者名/発表者名: Nguyen Linh Manh、Kanda Akira、Kamioka Yuji、Tokuhiro Keizo、Kobayashi Yoshiki、Yun Yasutaka、Bui Dan Van、Chu Hanh Hong、Le Nhi Kieu Thi、Suzuki Kensuke、Mitani Akitoshi、Shimamura Akihiro、Fukui Kenta、Dombrowicz David、Iwai Hiroshi
  • 雑誌名: Allergy 巻: Online ahead of print. ページ: 1-5
  • DOI: 10.1111/all.16061
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Distinct bidirectional regulation of LFA1 and α4β7 by Rap1 and integrin adaptors in T?cells under shear flow (2023)
  • 著者名/発表者名: Kamioka Yuji、Ueda Yoshihiro、Kondo Naoyuki、Tokuhiro Keizo、Ikeda Yoshiki、Bergmeier Wolfgang、Kinashi Tatsuo
  • 雑誌名: Cell Reports 巻: 42 ページ: 112580～112580
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2023.112580
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Rap1 organizes lymphocyte front-back polarity via RhoA signaling and talin1 (2023)
  • 著者名/発表者名: Ueda Yoshihiro、Higasa Koichiro、Kamioka Yuji、Kondo Naoyuki、Horitani Shunsuke、Ikeda Yoshiki、Bergmeier Wolfgang、Fukui Yoshinori、Kinashi Tatsuo
  • 雑誌名: iScience 巻: 26 ページ: 107292～107292
  • DOI: 10.1016/j.isci.2023.107292
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] The critical role of Rap1-GAPs Rasa3 and Sipa1 in T cells for pulmonary transit and egress from the lymph nodes (2023)
  • 著者名/発表者名: Horitani Shunsuke、Ueda Yoshihiro、Kamioka Yuji、Kondo Naoyuki、Ikeda Yoshiki、Naganuma Makoto、Kinashi Tatsuo
  • 雑誌名: Frontiers in Immunology 巻: 14 ページ: 01-13
  • DOI: 10.3389/fimmu.2023.1234747
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Thymocyte Development of Humanized Mice Is Promoted by Interactions with Human-Derived Antigen Presenting Cells upon Immunization (2023)
  • 著者名/発表者名: Fukuhara Takataro、Ueda Yoshihiro、Lee Sung-Il、Odaka Tokifumi、Nakajima Shinsuke、Fujisawa Jun-Ichi、Okuma Kazu、Naganuma Makoto、Okazaki Kazuichi、Kondo Naoyuki、Kamioka Yuji、Matsumoto Mitsuru、Kinashi Tatsuo
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 24 ページ: 11705～11705
  • DOI: 10.3390/ijms241411705
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Distinct bidirectional regulation of integrins by Rap1, talin1 and kindlin-3 in T cells under shear flow (2024)
  • 著者名/発表者名: Yuji Kamioka, Yoshihiro Ueda, Naoyuki Kondo, Tatsuo Kinashi
  • 学会等名: 第52回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Rap1-GAPs Rasa3 and Sipa1 are required for pulmonary transit and egress from the lymph nodes in T cells. (2024)
  • 著者名/発表者名: Shunsuke Horitani, Yoshihiro Ueda, Yuji Kamioka, Naoyuki Kondo, Makoto Naganuma, Tatsuo Kinashi
  • 学会等名: 第52回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Rap1-Talin1 axis facilitates front-back cell polarity independent of talin1 binding to integrins in lymphocyes (2024)
  • 著者名/発表者名: Yoshihiro Ueda, Koichiro Higasa, Yuji Kamioka, Naoyuki Kondo, Shunsuke Horitani, Yoshiki Ikeda, Wolfgang Bergmeier, Yoshinori Fukui, Tatsuo Kinashi
  • 学会等名: 第52回日本免疫学会学術集会
• [備考] 細胞接着分子インテグリンごとに異なる活性化メカニズムを発見
  • URL: https://www.kmu.ac.jp/news/laaes7000000p1ar-att/20230622Press_Release.pdf