| 研究課題/領域番号 |
21K06475
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
川上 隆史 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (60638881)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | PUREシステム / 遺伝暗号拡張技術 / SELEX / in vitro virus / cDNA display |
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| 研究実績の概要 |
Hisタグ精製によって調製した約３０種類の組換えタンパク質因子（T7 RNAポリメラーゼ、２０種類のアミノアシルtRNA合成酵素、翻訳開始因子、翻訳伸長因子、nucleotide-diphosphate kinase（NDK）、pyrophosphatase（PPase）, ribosome recycling factor (RRF)、クレアチンキナーゼ（CK）、アデニル酸キナーゼ（myokinaseなど）およびリボソームによって大腸菌由来の再構成型のin vitro転写・翻訳共役システム（Protein synthesis Using Recombinant Elememts system, PUREシステム）を構築した。
構築したPUREシステムと遺伝暗号拡張技術（genetic code expansion）とin vitro virus (mRNAディスプレイ）法あるいはcDNAディスプレイ法を用いて、芳香族求核置換反応などにより環状化した非天然型環状（Nアルキル）ペプチド化合物のDNAコード化ライブラリー（DEL）をリボソーム翻訳合成により調製した。
数兆種類の非天然型環状（Nアルキル）ペプチド化合物のDNAコード化ライブラリー（DEL）より、分子進化工学的スクリーニング（Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment, SELEX）法を用いて、高LDLコレステロール血症に関わる創薬標的タンパク質であるProprotein convertase subtilisin/kexin type 9（PCKS9）やアレルギー性疾患に関わる創薬標的タンパク質であるインターロイキン5（IL-5）などに結合する完全新規の非天然型環状（Nアルキル）ペプチド化合物を複数種類、同定することに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PUREシステムとin vitro virus (mRNAディスプレイ）と遺伝暗号拡張技術を組み合わせたSELEXにより、PCKS9やIL-5などに結合する完全新規の非天然型環状（Nアルキル）ペプチド化合物を複数種類、同定することに成功したため。
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| 今後の研究の推進方策 |
PUREシステムとin vitro virus (mRNAディスプレイ）と遺伝暗号拡張技術を組み合わせたSELEXにより、様々な創薬標的タンパク質に結合する新規非天然型環状（Nアルキル）ペプチド化合物を同定し、新規超高速スクリーニング技術開発の確立を目指す。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究計画が順調に進んだため、計画よりも研究費を抑えることが可能となった。また、所属機関の共用機器が使用可能となったため、計画よりも研究費を抑えることが可能となった。引き続き、生物学実験試薬・器具、化学実験試薬・器具などの物品費、配列解析のためのその他費用として使用する計画である。
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