「がん遺伝子DUSP4」の新規基質同定と治療応用

2023 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21K06888
• 研究機関: 大分大学
• 研究代表者: 守山 正胤 大分大学, 医学部, 客員研究員 (90239707)
• 研究分担者: 泥谷 直樹 大分大学, 医学部, 准教授 (80305036)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: DUSP4 / がん遺伝子 / 大腸癌 / 近位依存性ビオチン標識法 / 新規基質

研究実績の概要

KRASやBRAF遺伝子の活性型変異に伴って活性化するMAPキナーゼパスウェイは、多くの癌腫の発症や進展に重要である。加えて、癌腫の中には活性化したMAPキナーゼパスウェイを不活化する分子機構が破綻していることも報告されている。DUSP4は、MAPキナーゼを不活化する脱リン酸化酵素である。さまざまな癌腫でDUSP4の発現低下とそれに伴うMAPキナーゼの恒常的活性化が認められる。私たちは、膵上皮内癌が浸潤癌に進展する過程で、高頻度にDUSP4が欠失して発現低下することを見出した。さらに大腸癌が深部浸潤する過程でも、DUSP4の発現低下に伴うMAPキナーゼの活性化が関与することを報告した。
一方、癌腫によってはDUSP4が高発現しているものもあり、癌細胞の増殖能亢進や抗がん剤抵抗性、上皮間葉転換などに関わることが報告されている。私たちも、大腸癌の特定の亜型ではDUSP4が高発現しており、DUSP4を発現抑制すると増殖能が低下することを報告した。そこで本研究では、DUSP4のがん遺伝子としての機能的意義を解明するため、近位依存性ビオチン標識 (BioID)法を用いて新規基質の同定を試みた。
まず、DUSP4とビオチンリガーゼ(BirA)の融合タンパクを発現するプラスミドを構築した。次にそれをDUSP4高発現大腸癌細胞株HCT116に導入して、DUSP4-BirA融合タンパク安定発現細胞株を樹立した。この細胞株にビオチンを添加し、20時間後の細胞抽出液を電気泳動して、HRP標識ストレプトアビジンでビオチン化タンパクを確認すると、複数のバンドが検出された。現在、細胞抽出液を二次元電気泳動で展開して、ゲルから単一スポットを回収してアミノ酸分析にてタンパクの同定を試みている。

研究成果

• [雑誌論文] Involvement of clusterin expression in the refractory response of pancreatic cancer cells to a MEK inhibitor (2023)
  • 著者名/発表者名: Amada K, Hijiya N, Ikarimoto S, Yanagihara K, Hanada T, Hidano S, Kurogi S, Tsukamoto Y, Nakada C, Kinoshita K, Hirashita Y, Uchida T, Shin T, Yada K, Hirashita T, Kobayashi T, Murakami K, Inomata M, Shirao K, Aoki M, Takekawa M, Moriyama M
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 114 ページ: 2189～2202
  • DOI: 10.1111/cas.15735
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Efficient Establishment of Bile-Derived Organoids From Biliary Cancer Patients (2023)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita K, Tsukamoto Y, Hirashita Y, Fuchino T, Kurogi S, Uchida T, Nakada C, Matsumoto T, Okamoto K, Motomura M, Fukuchi S, Sagami R, Nagai T, Gotoh Y, Fukuda K, Ogawa R, Mizukami K, Okimoto T, Kodama M, Murakami K, Moriyama M, Hijiya N
  • 雑誌名: Laboratory Investigation 巻: 103 ページ: 100105～100105
  • DOI: 10.1016/j.labinv.2023.100105
  • 査読あり
• [雑誌論文] Patient-Derived Ex Vivo Cultures and Endpoint Assays with Surrogate Biomarkers in Functional Testing for Prediction of Therapeutic Response (2023)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto Y, Hirashita Y, Shibata T, Fumoto S, Kurogi S, Nakada C, Kinoshita K, Fuchino T, Murakami K, Inomata M, Moriyama M, Hijiya N
  • 雑誌名: Cancers 巻: 15 ページ: 4104～4104
  • DOI: 10.3390/cancers15164104
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Association of immune‐related expression profile with sensitivity to chemotherapy in esophageal squamous cell carcinoma (2023)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto Y, Kurogi S, Fujishima H, Shibata T, Fumoto S, Nishiki K, Suzuki K, Etoh T, Shiraishi N, Fuchino T, Hirashita Y, Nakada C, Uchida T, Inomata M, Moriyama M, Hijiya N
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 114 ページ: 4459～4474
  • DOI: 10.1111/cas.15942
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of VSNL1 Enhances Cell Proliferation in Colorectal Carcinogenesis (2023)
  • 著者名/発表者名: Aiba T, Hijiya N, Akagi T, Tsukamoto Y, Hirashita Y, Kinoshita K, Uchida T, Nakada C, Kurogi S, Ueda Y, Shiroshita H, Shiraishi N, Murakami K, Inomata M, Moriyama M
  • 雑誌名: Pathobiology 巻: 91 ページ: 121～131
  • DOI: 10.1159/000533877
  • 査読あり
• [学会発表] IMiDs/CELMoDによるATL細胞の増殖抑制とその機序 (2023)
  • 著者名/発表者名: 伊波 英克, 王 宇, 下崎 俊介, 池辺 詠美, 山本 淳一, ファイフ・ニコール , 市川 朝永, 堀 光雄, 緒方 正男, 塚本 善之, 泥谷 直樹, 守山 正胤, 萩原 將太郎, 草野 秀一, 斎藤 益満, 西園 晃, 半田 宏, 森下 和宏
  • 学会等名: 第85回日本血液学会学術集会
• [学会発表] Clusterinは膵癌細胞のMAPキナーゼ不応性に関与する (2023)
  • 著者名/発表者名: 泥谷 直樹, 塚本 善之, 黒木 秀作, 中田 知里, 守山 正胤
  • 学会等名: 第82回日本癌学会総会
• [学会発表] 膵癌においてANXA8はMAPK阻害薬耐性に関与する (2023)
  • 著者名/発表者名: 黒木 秀作, 泥谷 直樹, 塚本 善之, 中田 知里, 猪股 雅史, 小林 隆志, 守山 正胤
  • 学会等名: 第82回日本癌学会総会