| 研究課題/領域番号 |
21K06973
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
櫻井 靖高 北里大学, 医学部, 助教 (50733101)
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| 研究分担者 |
村雲 芳樹 北里大学, 医学部, 教授 (40324438)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | DNA損傷トレランス / 紫外線 / 突然変異 / 発癌 / REV7 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、紫外線が誘発する皮膚癌の発生にREV7が関与していることをマウス個体レベルで証明し、そのメカニズムを細胞・組織レベルで明らかにすることである。
本年度は細胞レベルの解析として、先行研究で得られた4種類のケラチノサイト細胞株（野生型、Polh欠損型、Rev7欠損型、Polh Rev7二重欠損型）を用いた解析を行なった。細胞の増殖速度を調べたところ、Polh欠損型細胞では細胞増殖に影響は見られなかったが、Rev7を欠損することで細胞の増殖速度が低下した。紫外線感受性解析を行ったところ、Rev7欠損型細胞はPolh欠損型細胞よりも高い感受性を示し、Polh Rev7二重欠損型細胞はそれぞれの単独欠損と比較して、相乗的な感受性の亢進を示した。Rev7欠損型細胞で見られる高い紫外線感受性がRev7の欠損に起因するかを調べるために、Rev7発現ベクターを用いてRev7の発現を回復させたところ、紫外線感受性が親株と同程度にまで回復した。さらに、紫外線によって生じる二本鎖切断を免疫染色で解析したところ、Polh欠損型細胞はRev7欠損型細胞よりも強いシグナルが得られた。この結果は、紫外線感受性の結果と逆転する結果であり、Rev7欠損型細胞が示す高い紫外線感受性には、DNA損傷トレランス機能だけでなく、二本鎖切断修復機能が関与している可能性が考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
皮膚特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスの樹立に失敗したため、本年度にマウスを用いた解析を進めることができなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
皮膚特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスは他施設より入手して解析を進める。突然変異頻度の解析には、次世代シークエンサーを用いた解析を導入し、効率化を図る。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定していた実験計画、特に動物実験系が遅れているために次年度使用額が生じたが、次年度に行う予定であり、今後の使用計画に大きな支障はないと考えている。
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