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2022 年度 実施状況報告書

DNA損傷トレランスタンパク質REV7を介した紫外線誘発皮膚癌の発生機序の解明

研究課題

研究課題/領域番号 21K06973
研究機関北里大学

研究代表者

櫻井 靖高  北里大学, 医学部, 助教 (50733101)

研究分担者 村雲 芳樹  北里大学, 医学部, 教授 (40324438)
研究期間 (年度) 2021-04-01 – 2024-03-31
キーワードDNA損傷トレランス / 紫外線 / 変異 / 発癌 / REV7
研究実績の概要

本研究の目的は、紫外線が誘発する皮膚癌の発生にREV7が関与していることをマウス個体レベルで証明し、そのメカニズムを細胞・組織レベルで明らかにすることである。
本年度は細胞レベルの解析として、各種遺伝子型のケラチノサイト細胞株(野生型、Polh欠損型、Rev7欠損型、Polh/Rev7二重欠損型)に対して紫外線損傷に誘発される変異頻度の解析を行った。紫外線損傷が存在しない場合、変異頻度が低く、各種遺伝子型間で差は認められなかった。一方、紫外線損傷が存在する場合、すべての遺伝子型で変異頻度の上昇が見られた。その中で、Rev7欠損型細胞は野生型細胞よりも低い変異頻度を示した。また、Polh欠損型は野生型よりも高い変異頻度を示したが、Rev7を欠損させることで変異頻度が抑制された。このことから、野生型細胞やPolh欠損型細胞で誘発される変異にREV7が関与していることが示唆された。
個体レベルの解析として、Polh/Rev7二重遺伝子改変マウスの作出を行った。当初使用する予定だったRev7ホモ欠損マウスが胎生致死を示したため、コンディショナルノックアウト(cKO)マウスを用いることにした。皮膚特異的にREV7を欠損させるために、K5プロモーター下でCreを発現するトランスジェニックマウス(K5-Cre)を熊本大学生命資源研究・支援センターより入手した。これらのマウスの交配を進めることで、Polh/Rev7cKO/K5-Creマウスを作出し、紫外線照射に対する応答の解析を進める予定である。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

皮膚特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスの樹立に失敗したため、他施設から入手することに変更した。入手手続きや発生工学、戻し交配などに計画外の時間になったため、当初計画よりもやや遅れている。

今後の研究の推進方策

Polh/Rev7cKO/K5-Creマウスを作出したのち、紫外線による発癌実験を行い、REV7欠損による皮膚癌発生への影響を解析する。また、発生した皮膚癌組織における変異スペクトラムの解析を進める。

次年度使用額が生じた理由

予定していた実験計画、特に動物実験系がやや遅れているが次年度に行う予定であり、今後の使用計画に大きな支障はないと考えている。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2023 その他

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] REV7 in Cancer Biology and Management2023

    • 著者名/発表者名
      Murakumo Yoshiki、Sakurai Yasutaka、Kato Takuya、Hashimoto Hiroshi、Ichinoe Masaaki
    • 雑誌名

      Cancers

      巻: 15 ページ: 1721~1721

    • DOI

      10.3390/cancers15061721

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [備考] 北里大学医学部病理学(村雲)単位

    • URL

      https://www.med.kitasato-u.ac.jp/lab/murakumo/

URL: 

公開日: 2023-12-25  

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