| 研究課題/領域番号 |
21K07044
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
池田 正徳 鹿児島大学, 医歯学域ヒトレトロウイルス学系, 教授 (30315767)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | SARS-CoV-2 / Nタンパク質 / スプリットルシフェラーゼアッセイ |
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| 研究実績の概要 |
SARS-CoV-2のNタンパク質であると同時に複製にも重要な蛋白質であることが報告されている。Nタンパク質はダイマー形成することが知られており、本研級ではダイマー形成を評価できるアッセイ系を開発し阻害剤を見出すことを目的としている。昨年度までにSARS-CoV-2のNタンパク質にluciferaseのN末端側ドメイン(NRL)とC末端側ドメイン(CRL)をリンカーを挟んで融合タンパク質として発現するプラスミドを作成した。２つの Nタンパク質を含むプラスミドを細胞内にリポフェクションにて細胞内に導入後培養後細胞を回収しルシフェラーゼ活性を測定するとシグナルが確認できた。本年度は化合物ライブラリーを添加しルシフェラーゼ活性を抑制する候補物質のスクリーニングを開始した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
SARS-CoV-2のNタンパク質がダイマー形成するとルシフェラーゼ活性を測定できるスプリットアッセイ系を開発することができた。現在、開発したアッセイ系を用いてルシフェラーゼ活性を抑制するような低分子化合物のスクリーニングを実施している。リード化合物が得られれば最適化合成を実施する予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在、SARS-CoV-2のNタンパク質のダイマー形成を評価できるアッセイ系を開発し、ダイマー形成を阻害するようなリード化合物のスクリーニングを実施している。リード化合物が見つかった場合には最適化合成を実施する。リード化合物が見つからない場合にはインシリコスクリーニングの併用についても検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
COVID-19の影響で学会出張などの経費が予想を下回ったため。また、化合物ライブラリーは申請者が所属しているセンターの低分子化合物を使用した。」
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