| 研究課題/領域番号 |
21K07661
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| 研究機関 | 国立研究開発法人国立がん研究センター |
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研究代表者 |
北條 秀博 国立研究開発法人国立がん研究センター, 東病院, 医員 (60638774)
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| 研究分担者 |
影山 俊一郎 国立研究開発法人国立がん研究センター, 東病院, 医員 (60644979)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 1細胞解析 / 食道癌 / 放射線治療 / PD-L1 / マクロファージ |
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| 研究実績の概要 |
初年度の研究成果として、患者同意が得られた計5例の放射線治療対象の食道扁平上皮癌患者から採取した治療前（3例）、治療中～治療後7日以内（4例）、治療後1か月後（2例）の組織検体を用いたSingle cell RNA sequencingを施行した。
上部消化管内視鏡にて採取された生検検体をMACS; Tissue Dissociation Kits (Miltenyi Biotec)を用いて細胞分離を行い、Single Cell 5' v1 Dual Index Gene Expression Libraries kit (10X Genomics)を用いてライブラリを作成し、Novaseq6000によるsequenceを行った。得られたFASTQファイルからR v4, Seurat v4、SingleRを用いてCell annotation, Gene expression analysis, Clustering analysis, 遺伝子発現解析を行った。その結果、放射線治療前、治療後いずれからも10000を超える細胞の単離、遺伝子発現解析が可能であった。細胞レベルでは放射線照射後にリンパ球の減少、マクロファージの増加が確認され、遺伝子発現レベルでも放射線によるIFN応答の増強や、VEGF pathwayの活性化などが確認された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
すでに初年度の研究成果として、患者同意が得られた計5例の放射線治療対象の食道扁平上皮癌患者から採取した治療前（3例）、治療中～治療後7日以内（4例）、治療後1か月後（2例）の組織検体を用いたSingle cell RNA sequencingを施行しており、おおむね順調に進展していると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
2021年申請時では2022年度の研究計画として前年度で得られたFASTQを基に、ドライ解析を行い放射線による微小環境変化の考察を予定していたが、前述のように研究は順調に進行しており、cell annotation, Gene Expression analysisの一部はすでに完了している。2022年度では引き続き研究への登録と腫瘍組織採取と解析を継続する。
また、得られた解析結果から、放射線治療により腫瘍微小環境で主に機能する細胞や遺伝子活性などを同定していく。放射線により誘導される免疫抑制遺伝子は、PD-L1のように免疫応答増強の治療標的になることが期待されるため、これらを中心にIDO, CTLA4, TIGIT, LAG3, ICOS等の開発が進んでおり、臨床応用が可能な免疫抑制遺伝子を中心に解析する。研究期間内に蓄積した解析データから、放射線による腫瘍微小環境変化に起因する個別の細胞、遺伝子発現を同定することで、免疫療法と放射線治療併用に関する新たな治療戦略を提案していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2021年度は、学会での発表も予定していたが、新型コロナの影響もあり研究の進捗を優先させたため、次年度に繰り越すこととなった。
2022年度では引き続き研究への登録と腫瘍組織採取と解析を継続する。
このため、試薬やガラス器具、プラスチック器具が更に必要となることが予想される。また、さらなる解析を行う事も考えておりその費用も必要となる。更に、国内、国際学会参加費、論文投稿に際し、校正費等にも使用する予定である。
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