| 研究課題/領域番号 |
21K07808
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
松島 小貴 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (80451871)
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| 研究分担者 |
嶋田 洋太 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (20560824)
小林 博司 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (90266619)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 遺伝子治療 / ライソゾーム病 / AAV / MPSII / GM1ガングリオシドーシス |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、抗ヒトトランスフェリン受容体抗体（TfRAb)と疾患欠損酵素の融合タンパク質をAAVベクターにより疾患モデルマウスへ導入し、全身、特に脳における治療効果を解析することを目的としている。
これまでにレンチウイルスベクターに抗ヒトTfRAbと酵素の融合タンパク質発現単位を搭載し、ヒトTfRノックインマウスを用いた解析を進めており、脳における治療効果を確認している。しかし、ヒトTfRAbと酵素の融合タンパク質発現単位がAAV搭載可能長より長いため、ヒトTfRAbの単鎖化を進めるとともに、単鎖抗体化に成功している抗マウスTfRAbを用いた検討を行っている。2022年度は、その抗マウスTfRAbとGM1ガングリオシドーシスの原因酵素であるβgalを融合したタンパク質を肝臓特異的に発現するAAVベクターを尾静脈注射し、疾患モデルマウスの治療効果を検討した。まず様々なウイルス量における短期効果を解析した結果、容量依存的な血中および末梢臓器の酵素活性を確認した。また、TfRAb融合酵素の脳への移行効率は高く、脳内の疾患原因物質の蓄積は正常化していた。一方で、高容量における貧血の副作用を認めたため、至適容量を1E-5E+12 vg/kgと決定した。次に至適容量における長期効果を確認したところ、長期に渡り血中および末梢臓器の酵素活性は維持されていた。短期効果の検討と同様、脳における原因物質の蓄積も正常化しており、i.v.で導入したAAVから発現するTfRAb融合酵素による脳の治療効果は高いことが示された。また数種類の行動実験を行った結果、複数の検討で治療効果が示された。現在は脳の各部位における免疫染色を行っており、様々な角度から治療効果の検討を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
抗ヒトTfRAbの遺伝子長が長いため抗ヒトTfRAb融合酵素発現単位のAAVへの搭載が困難であり、当初の計画から変更せざるを得なかったが、疾患モデルマウスにおける治療効果が非常に高く、脳での原因物質の蓄積が正常化していた。現在治療効果に関しては更に詳細に解析中であるが、これらの結果はマウスのPOC獲得には十分なデータであると考える。①の抗ヒトTfRAb鎖抗体化に成功した暁には、今までの検討を踏まえてより簡便に解析ができると考えている。以上のことから、おおむね順調に進展していると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
抗ヒトTfRAb融合酵素発現単位のAAVへの搭載が困難であり、当初の計画から変更せざるを得なかったが、①抗ヒトTfRAbの単鎖抗体化を進めること、②単鎖抗体化が成功している抗マウスTfRAbを用いて検討を進めること、を目的として研究を行なっている。②の結果、治療効果が極めて高いことが明らかとなった。現在までに生化学的解析、行動学的解析、および病理学的解析がほぼ終了しており、今後は病理学的解析の一部と生存への影響を解析して行く。また、共同研究先との共同出願で特許の申請も行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
初年度購入予定であった機器を別の予算で購入したためその予算を使用していない。コロナの影響で海外学会への出席を行なっていないため予算を使用しなかった。2023年度は複数の海外学会参加を予定しており、その分を使用する予定である。
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