| 研究課題/領域番号 |
21K07825
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
小田 朗永 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (80547703)
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| 研究分担者 |
野上 恵嗣 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (50326328)
北畠 正大 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (60457588)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 血友病A / 補充療法 / 高力価インヒビター / 脾臓微小環境 / ヒト化血友病マウス / 抗FVIII免疫応答 |
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| 研究実績の概要 |
血友病A（HA）は、内因性第VIII因子の欠損によって引き起こされる遺伝性出血性疾患である。FVIIIによる治療を受けている重症のHA患者の約30％がFVIIIに対する中和抗体を獲得し、治療が無効となる。高力価のインヒビターを持つHA患者の管理は、特に困難であるため、高力価インヒビター発現のメカニズムおよびFVIII特異的形質細胞（FVIII-PC）の動態を理解することは極めて重要である。FVIII-KOマウスにrFVIII製剤とリポポリサッカライド（LPS）を組み合わせて静脈注射したところ、脾臓でFVIII-PCの増加が確認された。脾臓摘出マウスまたは先天性無脾臓FVIII-KOマウスにLPS＋rFVIIIを投与すると、血清中のインヒビター濃度は約80％低下した。さらに、LPS＋rFVIIIで処理したインヒビター陽性FVIII-KOマウスの脾臓細胞または骨髄（BM）細胞を免疫不全マウスに移植すると、脾臓細胞投与マウスの血清にのみ抗FVIII IgG抗体が検出された。一方、BM細胞の投与では検出されなかった。さらにインヒビター陽性FVIII-KOマウスの脾臓細胞を脾臓摘出免疫不全マウスに移植したところ、血清中のインヒビター濃度は有意に低下した。従って我々は、高力価インヒビター産生を担うFVIIIプラズマ細胞（FVIII-PCs）は優先的に脾臓へリクルートされている事、そしてそこで増加するFVIII-PCsが高力化インヒビターとなる事を明らかにした。このFVIII-PCsの脾臓への誘因は、FVIII-PCsを支持する脾臓の特殊な微小環境（ニッチ）が存在しているために生じているという仮説を立て、現在更なる検証を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当該申請研究に係る知見を期間内に論文として発表できたため
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、インヒビター産生機構に関わる分子基盤を脾臓微小環境（ニッチ）の側面から解明する事を試みる。具体的には、①脾臓原基形成マスター制御因子であり、脾臓間葉系幹細胞マーカーであるTlx1発現細胞を追跡可能な新規レポーターマウス; Tlx1CreERT2-Venusマウスを用いて、脾臓ニッチとインヒビター産生への影響を明らかにする。
さらに免疫不全/血友病A（NOG HA）マウスへヒト末梢血や臍帯血細胞を移入する事により、ヒト免疫系を有するヒト化血友病マウスを作製し、中和活性を有するヒト抗FVIII IgG抗体産生誘導を試みる。
一方、免疫不全/血友病A（NOG HA）マウスへヒト臍帯血細胞移入する事により、ヒト免疫系を有するヒト化血友病（Hu-HA）マウスを作製した。このHu-HAマウスは、NOG由来のHuマウスとヒト造血幹細胞の生着率及び骨髄、脾臓、末梢血の免疫細胞分化能（CD8+T細胞、CD4+T細胞、CD19+B細胞、CD33+マクロファージ、CD56+NK細胞）が同等であった。今後、ヒト免疫細胞による特異的免疫応答を生体内で再現するために解析を行なっている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度に費用の高価な実験を控えているため
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