B型肝炎の治療抵抗性および病態進展における免疫チェックポイント分子の関与

2022 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 21K07989
• 研究機関: 大阪公立大学
• 研究代表者: 榎本 大 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (20423874)
• 研究分担者: LE THITHANHTHUY 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 特任講師 (10572175) ; 河田 則文 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30271191) ; 田守 昭博 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (30291595)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: B型肝炎 / 抗ウイルス治療 / 核酸アナログ / インターフェロン / 免疫チェックポイント

研究実績の概要

核酸アナログ治療開始後の肝発癌リスクとして可溶性免疫チェックポイント分子を含めた宿主因子、ウイルス因子、肝線維化の関与を明らかにするため検討を追加した。対象はエンテカビルを1年以上投与したB型慢性肝疾患122例である。
結果として、1) エンテカビル開始後4.3(1.1-7.6)年で13例が発癌した。治療開始後の累積発癌率は、3/5/7/10年で4.6/9.1/13.2/15.0％であった。2)LC(p<0.0001)、PLT<11.7万/mm3(p<0.0001)、FIB-4>4.08(p<0.0001)、年齢>49歳(p=0.0021)、IV型コラーゲン>200 ng/mL(p=0.0046)、AFP>6.4 ng/mL(p=0.0094)、ヒアルロン酸>143 ng/mL(p=0.0098)、HBsAg<3.53 logIU/mL(p=0.013)、APRI>1.58(p=0.047)で発癌率が有意に高かった。3) sICOS>164.71 pg/mL(p=0.014)、sPD-1<447.27 pg/mL(p=0.031)、sCD40<493.68 pg/mL(p=0.032)、sHVEM<2470.83 pg/mL(p=0.038)で発癌率が有意に高かった。4)多変量解析では、sPD-1<447.27 pg/mL(HR 4.537、95%CI 1.363-15.103)、AFP>6.4 ng/mL(HR 5.524、95%CI 1.084-28.164)が肝発癌に寄与する独立因子であった。また、発癌例おいてsPD-1はNA開始後6ヶ月(p=0.028)および1年(p=0.028)、発癌前1年(p=0.028)および6ヶ月(p=0.018)、発癌時(p=0.0077)にはNA開始時と比べ有意に低下したが、発癌前の再上昇は認めなかった。
結論としてHBV制御後肝発癌に関連する因子として、壊死・炎症に伴う肝細胞の再生など発癌ポテンシャルを反映するAFPに加え、がん免疫の疲弊を反映するsPD-1が抽出された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

既存の臨床検体を用いて血漿中の可溶性免疫チェックポイント関連をmultiplex immunoassaysを用いて測定するなど、後方視的検討による解析を進めることにより上記の結果を得ることが出来た。得られた結果については学会ならびに論文報告することが出来た(Kozuka R, Enomoto M, et al. Sci Rep. 2022;12(1):105)。
一方、患者から採取した末梢血リンパ球をHBV蛋白で刺激し、3Hチミジンの取り込みによってT細胞の増殖能を、ELISPOTアッセイによってIFNγやIL-10の産生能を測定するなど、基礎的研究も予定していたがこれに関しては遅れている。

今後の研究の推進方策

R4年度に得られたデータと臨床データとの比較、validationを行う。
1) 臨床データとの比較：上記より得られた末血中の免疫チェックポイント分子、T細胞増殖能、T細胞表面マーカーの経時的変化、肝組織内の遺伝子発現と臨床データを比較する。
① 抗HBV治療症例：奏功例と無効例の比較を行う。例えば治療中のHBVマーカー(HBs抗原、HBcr抗原、HBV DNA)の変化と可溶性チェックポイント分子の変化との関係を解析する。
② 肝病態進展症例：線維化ステージ（F1/F2/F3/F4）ごとの可溶性チェックポイント分子の比較、発癌例と非発癌例の可溶性チェックポイント分子の比較などを行う。
2) 外部コホートを用いたvalidation：OCU Liver Studyグループより症例を追加し、当院の患者コホートでの検討よりバイオマーカー候補にあがった分子の有用性について検証を行う。

次年度使用額が生じた理由

新型コロナウイルス感染拡大のため参加を予定していた学会はリモートになった。また、ELISPOTアッセイ、フローサイトメトリーなどの実験が遅れていること
によって、次年度使用額が生じた。R5年度には上記の推進方策に併せてこれらの遅れを取り戻すべく実験計画を加速させる。

研究成果

• [雑誌論文] Effectiveness of entecavir vs tenofovir disoproxil fumarate for functional cure of chronic hepatitis B in an international cohort (2022)
  • 著者名/発表者名: Hsu YC, Jun DW, Peng CY, Yeh ML, Trinh H, Wong GL, Kim SE, Chen CH, Oh H, Lin CH, Trinh L, Wong VW, Yoon E, Ahn SB, Huang D, Cho YK, Jeong JY, Jeong SW, Kim HS, Xie Q, Liu L, Riveiro-Barciela M, Tsai PC, Accarino EV, Toyoda H, Enomoto M, … Nguyen MH.
  • 雑誌名: Hepatology International 巻: 16 ページ: 1297～1307
  • DOI: 10.1007/s12072-022-10411-x
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Progression Rates by Age, Sex, Treatment, and Disease Activity by AASLD and EASL Criteria: Data for Precision Medicine (2022)
  • 著者名/発表者名: Park J, Le AK, Tseng TC, Yeh ML, Jun DW, Trinh H, Wong GLH, Chen CH, Peng CY, Kim SE, Oh H, Kwak MS, Cheung KS, Toyoda H, Hsu YC, Jeong JY, Yoon EL, Ungtrakul T, Zhang J, Xie Q, Ahn SB, Enomoto M, … Nguyen MH.
  • 雑誌名: Clinical Gastroenterology and Hepatology 巻: 20 ページ: 874～885.e4
  • DOI: 10.1016/j.cgh.2021.05.062
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] Long-term outcome of peginterferon-α2a treatment in patients with chronic hepatitis B: a single-center, real-world study in Japan (2022)
  • 著者名/発表者名: Masaru Enomoto, Ritsuzo Kozuka, Naoshi Odagiri, Kohei Kotani, Hiroyuki Motoyama, Etsushi Kawamura, Atsushi Hagihara, Hideki Fujii, Sawako Uchida-Kobayashi, Akihiro Tamori, Norifumi Kawada
  • 学会等名: 31st Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver (APASL 2022)
  • 国際学会
• [学会発表] PegIFN治療後の長期経過におけるHBs抗原陰性化例の特徴 (2022)
  • 著者名/発表者名: 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • 学会等名: 第108回 日本消化器病学会総会
• [学会発表] B型慢性肝炎の病態に基づいた両立支援の重要性 (2022)
  • 著者名/発表者名: 榎本 大, 小塚 立蔵, 河田 則文
  • 学会等名: 第108回 日本消化器病学会総会
• [学会発表] 核酸アナログ開始後のHBs抗原量の低下を予測する因子の検討 宿主遺伝子多型も含めて (2022)
  • 著者名/発表者名: 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • 学会等名: 第58回 日本肝臓学会総会
• [学会発表] Antiviral therapy reduces hepatocellular carcinoma risk among HBV patients in the indeterminate phase (2022)
  • 著者名/発表者名: Huang D, Tran AK, Yeh ML, Tsai PC, Chuang WL, Huang CH, Dai CY, Toyoda H, Yasuda S, Trinh H, Ogawa E, Ishigami M, Ito T, Kozuka R, Enomoto M, … Nguyen MH
  • 学会等名: 73rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • 国際学会
• [学会発表] Increased treatment response and bone density in patients with chronic hepatitis B switched to tenofovir alafenamide from other nucleos(t)ide analogue: 96-week results from a prospective multinational study (2022)
  • 著者名/発表者名: Ogawa E, Jun DW, Toyoda H, Hsu YC, Yoon E, Ahn SB, Do ST, Trinh HN, Takahashi H, Enomoto M, … Nguyen MH
  • 学会等名: 73rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • 国際学会
• [学会発表] PegIFN治療後の長期経過におけるHBsAg陰性化予測因子の検討 (2022)
  • 著者名/発表者名: 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • 学会等名: 第26回 日本肝臓学会大会
• [学会発表] 核酸アナログ多剤耐性例のウイルス学的特徴 (2022)
  • 著者名/発表者名: 林 佐奈衣, 榎本 大, 松浦 健太郎, 井出 達也, 松居 剛志, 髭 修平, 榎本 平之, 渡邊 丈久, 長岡 克弥, 立山 雅邦, 田中 靖人
  • 学会等名: 第26回 日本肝臓学会大会
• [学会発表] B型肝炎の治療戦略の現状-次世代までに今，出来ること- (2022)
  • 著者名/発表者名: 榎本 大
  • 学会等名: 第64回日本消化器病学会大会サテライトシンポジウム96
  • 招待講演