| 研究課題/領域番号 |
21K08286
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
柳川 宏之 順天堂大学, 医学部, 助教 (60722759)
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| 研究分担者 |
鈴木 仁 順天堂大学, 医学部, 教授 (10468572)
鈴木 祐介 順天堂大学, 大学院医学研究科, 教授 (70372935)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | IgA腎症 / MHC classⅡ / 遺伝子多型 / ddYマウス / gddYマウス |
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| 研究実績の概要 |
IgA腎症自然発症マウスであるddY マウスの主要組織適合遺伝子複合体（MHC） classⅡ領域の遺伝子配列をsanger sequencing法を用いて決定した。その結果、ddY マウスのMHC classⅡのハプロタイプが3つに分類できる（以下ddY（s/s）, ddY（s/q）, ddY（q/q）と記載）ことが明らかになった。先行研究で樹立した全例で早期発症のphenotypeを示すgddYマウスのMHC classⅡのハプロタイプがs/sであることも明らかになった。そこで「ddY（s/s）が早期発症群である」という仮説の下、研究を行った。
本研究では、まずハプロタイプs, qをそれぞれ認識する抗マウスMHC classⅡ抗体（OX-6, NIMR4）を用いてタイピングを行い、各マウスのMHC classⅡのハプロタイプを決定した。20匹のddYマウスに対してMHC classⅡのタイピングを行い、ddY（s/s）が8匹、ddY（s/q）が9匹、ddY（q/q）が3匹であった。それらマウスの30週齢以降の尿タンパクの評価を行い、40週時点での糸球体の蛍光免疫染色（IF）と免疫染色で組織の変化を評価した。40週齢時点でddYマウスにおいて、Balb/cマウスと比較して有意に尿蛋白の増加を認め、IFで糸球体へのIgAの沈着とPAS染色にてメサンギウム細胞の増多を認めた。しかしながら、ddY マウスのMHC classⅡのハプロタイプ間で比較をすると、尿タンパク、IF所見、PAS染色での相違は認めなかった。さらに、ddY マウスを4週齢以降、週齢毎（4, 8, 12, 16, 20, 24週齢、それぞれN=8）にIFで糸球体へのIgAの沈着を評価した。その結果、全ての週齢で糸球体へのIgAの沈着を認めたが、尿タンパクの増加は認めなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
現時点でddY マウスにおけるハプロタイプ間のphenotypeの相違を見出すことができていない。先行研究ではddY マウスの尿タンパクは40週齢以降にさらに増加していくことが報告されている。今回、評価のタイムポイントの設定が40週齢であったため、ハプロタイプ間でのphenotypeの違いを見出せなかった可能性がある。
さらに、当初の予想と反して、先行研究で報告されたようにIgA腎症の発症時期による分類ができなかった。原因としては、ddY マウスは近交系マウスであるため、遺伝子は統一されておらず、起源のコロニーが異なることでphenotypeに違いが出る可能性がある。また、先行研究のddY マウスではMHC classⅡのハプロタイプによるタイピングを行っておらず、今回の研究とは異なるハプロタイプであった可能性がある。近年の全ゲノム関連解析（genomie-wide association study;GWAS）により、MHC classⅡ領域の遺伝子多型が、IgA腎症と強く相関を持つことが明らかにされている。本研究では当初、「ddY（s/s）が早期発症群、ddY（s/q）が晩期発症群、ddY（q/q）が未発症群」と仮説を立て検証を行ったが、ddYマウスの糸球体にはIgAが沈着し、Balb/cマウスには沈着しないことから、ハプロタイプsとqいずれもがIgAの糸球体への沈着、そしてIgA腎症の発症に関与する可能性がある。今後は異なる手法でMHC classⅡのハプロタイプによる変化を評価し、これらの相関を検討する。
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| 今後の研究の推進方策 |
先行研究にて、ddYマウスにToll like receptor 9（TLR9）のアゴニストである非メチル化CpG DNAを経鼻的に投与することでガラクトースを欠損する糖鎖異常IgAを誘導し、腎炎が増悪することが明らかになっている。今後はCpG投与によるddYマウスの糖鎖異常IgAの誘導において、MHC classⅡのハプロタイプ毎の変化を検証する。具体的には、タイピングを行ったddY マウスを用いて、CpGを経鼻腔的に投与する。投与後、ハプロタイプ毎に採血を行い、血清中の糖鎖異常IgAをELISA法にて評価し、ハプロタイプによる糖鎖異常IgAの誘導の変化をみる。さらに糖鎖異常IgAの誘導による尿タンパクの変化やIFでのIgA, IgG, C3の沈着の程度、PAS染色でのメサンギウム細胞増殖を評価し、IgA腎症の発症とMHC classⅡの相関を検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
Toll like receptor 9（TLR9）のアゴニストである非メチル化CpG DNAのddYマウスへの投与におけるMHC classⅡのハプロタイプ間での比較検証については、今年度未施行である。本実験は来年度に検証を行う予定であるため、来年度に予算計上とした。
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