研究課題/領域番号 |
21K08353
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研究機関 | 京都府立医科大学 |
研究代表者 |
加藤 則人 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30244578)
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研究分担者 |
浅井 純 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50438222)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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キーワード | γδT細胞 |
研究実績の概要 |
本研究は、申請者が世界で初めてcancer tissue-originated spheroid法によって確立した培養乳房外Paget病細胞を用いて、EMPDに対するγδT細胞療法の効果をin vitro, NOD/Scidマウスへの移植モデルで検討する。 末梢血より単核球を分離し、14日間培養を行い、フローサイトメトリーにて4から5%程度のVδ2Vγ9T細胞を確認した。次にゾレドロネートによる刺激を加えて培養したところ、培養した単核球中の90%以上がVδ2Vγ9T細胞へ分化、増殖していることを確認した。 ヒト末梢血由来Vδ2Vγ9T細胞の乳房外パジェット病に対する抗腫瘍効果を検討するため、乳房外パジェット病の腫瘍組織より分離、培養したCTOSを用いた基礎実験を行った。CTOSにin vitroで増殖させたVδ2Vγ9T細胞を共培養させ、CTOSの形態、大きさの変化を解析したが、対照群(T細胞共培養群)、Vδ2Vγ9T細胞共培養群ともにCTOS細胞が消失し、対照群との有意な変化は認められなかった。また、同様に血管肉腫の腫瘍細胞株であるISO-HASに対しVδ2Vγ9T細胞を共培養させ、抗腫瘍効果を検討した。対照群(T細胞共培養群)に対しVδ2Vγ9T細胞共培養群ではやや抗腫瘍効果がみられたが、有意差はみられなかった。 次に、Vδ2Vγ9T細胞の細胞毒性をLDH assayを用いて数値的に評価するために、接着細胞であるISO-HASとの共培養実験も行った。時間による細胞毒性の違いを検討したところ、ISO-HASでは約半日経過した時点で細胞毒性が出てきていたが、Vδ2Vγ9T細胞共培養群は対照群(T細胞共培養群)と比較して細胞毒性が弱い結果となり、予想していた結果と反対の結果となった。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
Vδ2Vγ9T細胞と乳房外Paget病のCTOSやISO-HASとの共培養では、現時点では抗腫瘍効果が得られていないが、Vδ2Vγ9T細胞を誘導する手法は何種類か存在しており、今回採用した手法が適していなかった可能性や、Vδ2Vγ9T細胞に対する処理を加えなければならない可能性も考えられ、γδ細胞実験を継続する上で貴重な情報が得られた。
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今後の研究の推進方策 |
ゾレドロネートによる刺激だけではCTOSだけでなく、ISO-HASに対する抗腫瘍効果も得られなかった。そのため今後の研究では、Vδ2Vγ9T細胞の誘導方法の再検討も含め、いかにして抗腫瘍効果をあげられるかを検討していく必要がある。
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