| 研究実績の概要 |
若年性骨髄単球性白血病（JMML）において高頻度に認められるPTPN11変異のメチル化への影響を明らかにすることを目的とした。
網羅的メチル化解析を実施するため、効率よくiPS細胞からCD34陽性細胞を分化誘導し、それらの細胞から高濃度のゲノムDNAを抽出する必要であった。そこで、CD34陽性細胞分化誘導時に使用するSCF, BMP-4, VEGF,TPOのサイトカインについて、添加順序、濃度、日数を検討した。4種類のサイトカイン濃度について全てのサイトカインについて1.5倍から２倍量を使用することでCD34陽性細胞数が増えた。さらに、CD34陽性細胞を剥離回収する際のピペット操作を繰り返すことにより回収細胞数を増加させることができ、より細胞を分散化でき、その後の磁気ビーズを用いた細胞分離による回収細胞数が増加し、高濃度のゲノムDNAを回収できるようになった（2021年度から2022年度の成果）。
上記の検討の結果を踏まえ2022年度末に網羅的メチル化解析（ビーズアレイ）委託解析することができた。CpGアイランド、遺伝子、およびプローブ別のメチル化率の違いについて、PTPN11変異陽性・陰性、およびそれらをゲノム改変し変異修復、導入した4種類のiPS細胞由来CD34陽性細胞を対象にして比較解析を行った。その結果、43個の遺伝子は、PTPN11変異陽性（導入）細胞において高いメチル化率を示し、103個の遺伝子は、PTPN11変異陰性（修復）細胞において高いメチル化率を示すことを明らかにした。（2023年度成果）。
今後、本研究の成果を踏まえ、PTPN11変異よりメチル化率が変動した各遺伝子群の遺伝子について、それらの機能分類やRNA発現解析やタンパク解析を行い、PTPN11変異によるメチル化調節機構を明らかにしたい。
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