不適合HLA-DP抗原認識抗体を用いた移植後再発に対するCAR-T細胞の開発

2023 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21K08369
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 赤塚 美樹 名古屋大学, 医学系研究科, 特任教授 (70333391)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: 移植片対白血病効果 / キメラ抗原受容体 / HLA

研究実績の概要

白血病に対してHLA一致非血縁者間移植を受けた患者の7割に何らかのHLA-DP不適合が発生し、抗白血病効果（GVL）が誘導される。本研究では抗HLA-DPサブタイプ抗体導入CAR-T細胞による移植後白血病治療を目的としている。昨年度、蛍光を標識した抗原を用いてハイブリドーマをソーティングし、免疫に用いたHLA-DPB9A2分子に対して反応する2クローンが得られたため本年度はその培養上清の特異性をさらに検討した。その結果、他のHLAクラスII分子であるHLA-DRB1A1、HLA-DQB2A5およびHLA-DQB3A4に対しては反応せず、HLA-DPB9A2に対して中等度（コントロールに対して1 log陽性にシフト）反応を示したことから、特異性の高い抗体産生ハイブリドーマを得るためのシステムはほぼ確立できた。ただし臨床応用性に関しては、特異性は高いものの標的抗原に対する親和性はまだ十分とは考えにくく、ハイブリドーマの再調整が必要と判断した。
今回、Fc受容体（CD64）強制発現ハイブリドーマ細胞上に産生された抗体をトラップしておき、蛍光結合標的抗原で標識してソーティングする系を開発したが、細胞癒合後に過半数のハイブリドーマがCD64を喪失する問題があった。これに対して癒合後も発現が比較的保たれやすいBCMA分子や組織適合性抗原H-2を足場にできないか検討した。抗BCMA抗体の既報配列、抗H-2Kd抗体産生ハイブリドーマHB-11の抗体遺伝子配列をもとに単鎖抗体を作成、これに蛍光蛋白またはFc受容体を結合したキメラ分子をデザインし、293Tで発現・分泌させたところ、一部のキメラ分子が細胞表面に結合すること確認した。今後ハイブリドーマをこのキメラ分子で処理し、細胞表面に分泌される抗体をトラップした後、蛍光結合抗原で標識してソーティングする系を確立する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Development of TCR-T cell therapy targeting mismatched HLA-DPB1 for relapsed leukemia after allogeneic transplantation. (2023)
  • 著者名/発表者名: Barakat C, Inagaki Y, Mizuno S, Nishio N, Katsuyama N, Sato Y, Kobayashi M, Ozeki K, Iida H, Tomita A, Sawa M, Demachi-Okamura A, Takahashi Y, Nishikawa H, Akatsuka Y.
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: 118 ページ: 252-266.
  • DOI: 10.1007/s12185-023-03621-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] T cell receptor-engineered T cells derived from target human leukocyte antigen-DPB1-specific T cell can be a potential tool for therapy against leukemia relapse following allogeneic hematopoietic cell transplantation. (2023)
  • 著者名/発表者名: Katsuyama N, Kawase T, Barakat C, Mizuno S, Tomita A, Ozeki K, Nishio N, Sato Y, Kajiya R, Shiraishi K, Takahashi Y, Ichinohe T, Nishikawa H, Akatsuka Y.
  • 雑誌名: Nagoya J Med Sci 巻: 85 ページ: 779-796
  • DOI: 10.18999/nagjms.85.4.779
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hematological immune-related adverse events of immune checkpoint inhibitors and their management (2023)
  • 著者名/発表者名: Akatsuka Y
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki 巻: 64 ページ: 782-790
  • DOI: 10.11406/rinketsu.64.782
• [学会発表] 同種造血幹細胞移植後の白血病再発に対するTCR-T細胞療法の開発. (2023)
  • 著者名/発表者名: 1.Carolyne BARAKAT, Yuichiro INAGAKI, Shohei MIZUNO, Naoya KATSUYAMA, Yoshie SATO, Miki KOBAYASHI, Kazutaka OZEKI, Akihiro TOMITA, Hiroatsu Iida, Masashi SAWA, Yoshiki AKATSUKA.
  • 学会等名: 第15回日本血液疾患免疫療法学会
• [学会発表] トランスポゾンを用いたTCR-T細胞調整条件の検討 (2023)
  • 著者名/発表者名: 2.陳 浩, 木村実茂, Carolyne Barakat, 西尾信博, 佐藤由英, 鈴木哲, 岡村文子, 高橋義行, 赤塚美樹.
  • 学会等名: 第27回日本がん免疫学会
• [学会発表] Development of TCR-T cell Adoptive immunotherapy targeting mismatched HLA-DPB1 for leukemia relapse after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. (2023)
  • 著者名/発表者名: 3.Carolyne BARAKAT, Naoya KATSUYAMA, Yoshie SATO, Miki KOBAYASHI, Yuichiro INAGAKI, Kazutaka OZEKI, Shohei MIZUNO, Akihiro TOMITA, Masashi SAWA, Yoshiki AKATSUKA.
  • 学会等名: 2nd JCA-AACR Precision Cancer Medicine International Conference.