研究課題
2021年度には、ダニ粗抗原に応答してT細胞IL-5産生が誘導され、吸入負荷で遅発型喘息反応が認められる症例の末梢血単核球から、抗原刺激、限界希釈法にて、複数のT細胞クローンを樹立した。培養ヒトあるいはマウス気管支平滑筋細胞を、コラーゲンゲルに封入し、6日間培養後に収縮活性のアッセイに用いた。実験喘息モデルには、卵白アルブミン（OVA）特異的T細胞受容体トランスジェニックマウスより、T細胞クローンを複数樹立し、固相化抗CD3抗体で活性化し、上清中のサイトカイン産生を特異的ELISAで測定した。各々のT細胞クローンを無処置マウスに移入し、抗原チャレンジ後、無拘束呼吸機能解析装置（BUXCO）を用いてPenh（enhanced pause）値を、また麻酔下、レスピレータ装着下に呼吸機能測定装置（BUXCO社）を用いて、呼吸抵抗（RL）値を測定した。in vivoの抗原特異的遅発型喘息反応と、in vitroでのT細胞クローン培養上清中の気管支平滑筋収縮活性の関連について解析した。活性化に伴い気管支平滑筋収縮活性を産生するT細胞クローンを複数樹立できたので、2022年度には、上清を大量に作成し、濃縮、保存した。収縮活性の精製を目指し、ゲル濾過、イオン交換により分画し、平滑筋収縮活性を評価した。平滑筋収縮活性の高いクローンと平滑筋収縮活性のないクローンとの間で、遺伝子発現解析、生化学的精製、プロテオーム解析を実施し、候補分子の探索を開始した。 2023年度には、十数個のタンパク質を候補分子として絞り込み、リコンビナント体の作成、中和抗体による活性の阻害実験を実施した。有意な収縮活性を有する分子を見出せたものの、中和抗体でクローン上清の収縮活性を中和できなかったことから、収縮活性を担う責任分子との同定には至らなかった。残る候補分子について、収縮活性および中和抗体の評価を進めている。
すべて 2023
すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (9件) (うち国際学会 6件)
Scientific Reports
巻: 13 ページ: 5342-5342
10.1038/s41598-023-32513-8
