| 研究課題/領域番号 |
21K08571
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
佐伯 久美子 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 非常勤講師 (80322717)
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| 研究分担者 |
西尾 美和子 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 准教授 (30623318)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | BATokine / skeletal muscle cells / glucose uptake / HPLC / human ES cells |
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| 研究実績の概要 |
褐色脂肪組織（BAT）は高い熱産生能能を持つ脂肪組織である。小型哺乳類では寒冷環境での体温維持に寄与するが、ヒトでは可溶性因子（BATokine）を介した代謝向上が主たる作用である。加齢で減少するため、中年太りやサルコペニアなどの加齢が関係した代謝障害の病態生理を考えるうえでBAT研究は欠かせない。
本研究では、褐色脂肪細胞が分泌する生理活性因子BATokineの1つとして、先行研究でヒト多能性幹細胞由来褐色脂肪細胞の培養上清中にその存在を見出している「糖代謝改善因子である骨格筋ブドウ糖取込み促進因子」の同定に取り組んでいる。
具体的には、京都大学で樹立されたヒトES細胞、および研究代表者が樹立したヒトiPS細胞を用いて、研究代表者が開発した技術（特許5998405）で作製したヒト多能性幹細胞由来褐色脂肪細胞（ヒトBA）を材料として、研究代表者が開発した技術（WO2020036184A1）を駆使して同因子の構造を同定する。当該因子の活性は、マウスC2C12細胞由来骨格筋細胞およびヒト骨格筋細胞(市販の骨格筋芽細胞より分化誘導)の両者を用いて、Glucose Uptake Assay Kit-Green (同仁化学研究所)およびGlucose Uptake-Glo Assay (プロメガ社)を活用して定量的に評価する。
2022年度の研究では、大量調整したヒトBAの培養上清（BA-SUP）を高速液体クロマトグラフィ（HPLC）で細分化し、質量分析機を用いた構造解析に充分量の活性成分を得る作業を鋭意進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
担当学生が実験に参加できない状況があったため、BA-SUPの大量調製に遅れが生じた。2023年度からは状況が改善している。
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| 今後の研究の推進方策 |
従来の研究計画通り、少量BA-SUPで検討した条件を参考に、BA-SUPの大量調製から種々のカラムを用いたHPLCにより目的因子を濃縮し、質量分析機での構造解析に十分な質と量の活性画分を得たうえで、研究期間中(令和4年度末)に全アミノ酸配列(含、修飾)を決定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究進捗が当初計画より遅れたため、翌年度に繰り越すこととなった。このように研究進捗に遅れは生じたものの、研究計画は当初の方針に沿って進められており、繰り越した研究費は、ヒト胚性幹細胞からのBA分化誘導に用いる培養液やプラスチック培養製品の購入費、論文投稿費に充てる計画である。
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