| 研究課題/領域番号 |
21K08615
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
野竹 剛 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 助教 (40645511)
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| 研究分担者 |
清水 明 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 准教授 (00447773)
窪田 晃治 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 講師 (10598220)
副島 雄二 信州大学, 学術研究院医学系, 教授 (30325526)
増田 雄一 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 講師 (60467149)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 制御性T細胞 / CD8 / follicular helper T細胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、主に follicular helper T細胞（TFH）を抑制するとされるCD8陽性制御性T細胞（CD8 Treg）の性質に関する基礎的な検討と臓器移植への応用を目指している。
過去の報告によると、CD8陽性Tregの細胞表面マーカーとして、Ly49, CD44, PD1, CXCR5といったものがあげられている。我々はこれまでの研究で、転写因子IRF2依存性に存在するLy49陽性CD8陽性T細胞（Ly49陽性T細胞）についての特徴についての検討を行ってきている。そこでまず、IRF2依存性Ly49陽性T細胞がCD8Tregと相同であるとの作業仮設の元に、令和4年度において以下の検討を行った。
【検討内容】前年度（R3年度）の検討では、naiveな状態のマウスを用いてLy49陽性T細胞のCD44やPD1, CXCR5の発現の有無について検討したところ、Ly49陽性T細胞にはCD44やPD1は発言しているものの、CXCR5は発現しておらず，すでに報告されているCD8 Tregとはphenotypeが異なっていた。Naiveな状態ではそもそもTFHが存在しない可能性を考え、ペプチドを用いてex vivo刺激を加えたマウスにおいて同検討を行うこととした。
【結果】OVAペプチドペプチドを用いたex vivoのTFH刺激系に、purifyしたLy49陽性T細胞を共培養することで，TFHの活性化を抑制し抗体産生量が変化するか検討を行うこととした。しかし、現在ex vivoのTFH刺激系を確立することができていない。このため、Ly49陽性T細胞の有無による抗体産生量の評価にまでは至っていない。
【現在の状況】ペプチド刺激の方法が不十分であった可能性を考え、現在刺激方法について条件の検討を行っているところである。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
他業務に費やすエフォートの比重を多くしなければならなくなり、本研究のためにほとんどエフォートを割くことができなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
① Ex vivo刺激系の条件検討を行い、十分にTFHが活性化された実験系を確立する。
② 確立したTFH刺激系より、我々が注目しているLy49陽性CD8陽性T細胞（Ly49陽性T細胞）をpurifyして、活性化したTFHと共培養することで、Ly49陽性T細胞のTFH機能抑制効果を評価する。
③ マウス皮膚移植モデルを作成し、体表リンパ節でのTFHやCD8 Tregの数、活性化状態において検討を行う。さらには野生型マウスとIRF2欠損マウスでの上記細胞集団の差異についても併せて検討する。
④ 肝移植患者検体を用い、グラフト肝のHLA-C発現量やサブタイプと、拒絶反応の発症率ならびに重症度について検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由：臨床業務に費やすエフォートが増えてしまい、本研究にを遂行するための時間を確保することが困難であった。このため、当初見込んでいた実験、特に実験動物を用いたex vivo刺激実験系やマウス皮膚移植モデルを用いた実験を行うことができなかった。このため令和4年度必要額として計上した金額を下回ることとなった。
次年度使用額の使用計画：今年度取り組むことのできなかった動物実験系に取り掛かる。また、過去の肝移植患者の臨床データおよびサンプルを用いた解析にも取り掛かる。
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