| 研究課題/領域番号 |
21K08650
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
田中 奈々 順天堂大学, 医学部, 准教授 (50530656)
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| 研究分担者 |
浦尾 正彦 順天堂大学, 医学部, 教授 (00213504)
宮原 克 順天堂大学, 大学院医学研究科, 技術員 (00420844)
藤原 なほ 順天堂大学, 医学部, 准教授 (20589543)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | Hirschsprung disease / ENCC / enteric nervous system |
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| 研究実績の概要 |
ENCCのみが蛍光発色するH病モデルマウスの作製：SOX10-VENUS Tg マウスと EDNRB(ヘテロ接合:+/-)の交配を行い、SOX10-VENUS+/ EDNRB(-/-)マウスを作製。SOX10-VENUS+/ EDNRB(+/+)マウスはコントロール(WT)とした。当初計画では、腸間膜を横断する近道するENCCと、順行性に発達していくENCCとを分離してNeurosphereを作成し、インテグリンの発現の違いをみる予定であったが、腸間膜内のENCCの数が少なかったために、腸間膜内ENCCのNeursphere作成が困難であった。そのため、まずは腸管ENCCからのNeurosphreを作成し、令和4年度に行う予定であったH病無神経節腸管への移植実験を先行して行った。在胎18.5日のコントロールマウス腸管よりENCCを分離しNeurosphereを作成し、SOX10-VENUS+/ EDNRB(-/-)マウスの無神経節腸管に移植した。24.48.72時間共培養し、ホールマウントプリパレーションにて染色し、３Ｄイメージにて組織学的評価を行った。移植されたENCCが３Ｄイメージにて筋層内にmigrateしていく様子が観察された。また、neronのマーカーである、TUJ1陽性細胞の割合が、24時間から72時間で高くなっていくことが示され、移植したENCCの分化がすすんでいることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定では、Neurosphereを作成する際、腸間膜を横断する近道するENCCと、順行性に発達していくENCCとを分離して作成する計画であったが、腸間膜内のENCCの数が少なかったために、腸間膜内ENCCのNeursphere作成が困難であったため、まずは腸管ENCCからのNeurosphreを作成し、令和4年度に行う予定であったH病無神経節腸管に移植実験を先行して行ったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年度に行った移植実験を発展させ、生着したENCCの分化に部位別の差があるのかを検討する。さらに、KOマウスの無神経節腸管だけでなく、正常腸管の無神経節腸管にも移植を行い、生着・分化に差があるかを検討する。正常マウスの場合、在胎13-14日齢までにENCCは肛門まで到達するため、レシピエント腸管はWTでは腸管神経が到達していない遠位後腸が存在する在胎9.5-10.5日を選択。HDマウス腸管は、遠位後腸は出生後まで無神経節腸管のままであるため、在胎9.5～日齢3で3～4ポイントを選択する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
二つの国際学会に現地参加するための旅費を計上していたが、新型コロナの影響で現地参加がかなわず、web参加となったため、交通費や滞在費が削減されたため。新型コロナの状況を鑑みて海外学会での発表が可能に状況となったら複数の学会発表を予定している。また、前倒しした移植実験・免疫染色の試薬を追加購入予定である。
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