| 研究課題/領域番号 |
21K08680
|
|---|
| 研究機関 | 群馬大学 |
|---|
研究代表者 |
川端 麗香 群馬大学, 未来先端研究機構, 講師 (90721928)
|
|---|
| 研究分担者 |
小林 良祐 群馬大学, 生体調節研究所, 日本学術振興会特別研究員(PD) (30802855)
畑田 出穂 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (50212147)
大日方 英 群馬大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (50332557)
横堀 武彦 群馬大学, 未来先端研究機構, 准教授 (60420098)
調 憲 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (70264025)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| キーワード | 膵がん / O-GlcNAc修飾 |
|---|
| 研究実績の概要 |
本研究は、膵がん治療におけるO-GlcNAc分解酵素OGA経路の重要性とその分子機構の解明を目指すものである。
本年度は、KRAS変異陽性・陰性の膵がん細胞株を利用し、OGA阻害による細胞増殖能が抑制の確認と、メカニズムの策定を行なった。
まず、KRAS変異陽性細胞２種類と、陰性細胞２種類を対象に、OGA阻害による細胞増殖能の抑制を確認するために、shRNAによるノックダウン、阻害薬 (PUGNAC) を用いOGA経路を阻害し、細胞増殖能を生細胞数測定、コロニー数測定で評価したところ、KRAS野生型細胞株でKRAS変異細胞株よりも顕著な細胞増殖能の低下を認めた。
OGA阻害細胞を対象としたRNA-seq解析を実施し、OGA阻害による細胞増殖能、コロニー形成能抑制に関わる経路を抽出した。 また、O-GlcNAc抗体を用いた免疫共沈降法を用いて、OGA阻害細胞において細胞内タンパク質のO-GlcNAc修飾が増加することを確認した。
現在、質量分析計を利用した、OGA阻害細胞株の網羅的O-GlcNAc修飾プロテオーム解析を実施している。さらに、OGA阻害による抗がん剤(5-FU)感受性への影響を検討し、現在オミックス解析を実施している。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
OGA阻害細胞の細胞増殖能、コロニー形成能、薬剤感受性試験、および処理細胞のRNA-seq解析と順調に進んでいる。
O-GlcNAc抗体を用いた免疫共沈降法では、これまで使用していた抗体では濃縮効率が低かったため、新たな抗体を購入し、十分に濃縮することが確認できた。
|
| 今後の研究の推進方策 |
1) 抗がん剤感受性への影響の検証: KRAS変異陽性・陰性の膵がん細胞株を利用し、OGA阻害による効果を検証する。shRNAによるノックダウン、CRONUS systemによるノックアウト、阻害薬 (PUGNAC等) を用いOGA経路を阻害し、抗がん剤 (Gemcitabine) 感受性への影響を生細胞数測定あるいはコロニー形成アッセイで評価する。
2) 細胞増殖能・抗がん剤感受性を引き起こすメカニズムの検討:
OGA阻害細胞のトランスクリプトミクス、O-GlcNAc修飾・リン酸化タンパク質の網羅的解析を行う。具体的には、処理細胞のRNA-seqおよび、O-GlcNAc抗体、リン酸化セリン・スレオニン抗体で免疫沈降し、質量分析計TripleTOF 6600を用い網羅的に定量する。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
臨床検体の解析件数が予定よりも少なかったため。次年度に解析実施予定である。
|
