| 研究課題/領域番号 |
21K08720
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| 研究機関 | 大阪医科薬科大学 |
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研究代表者 |
廣川 文鋭 大阪医科薬科大学, 医学部, 非常勤講師 (20322373)
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| 研究分担者 |
高井 真司 大阪医科薬科大学, 医学研究科, 教授 (80288703)
辻川 和丈 大阪大学, 大学院薬学研究科, 教授 (10207376)
谷口 高平 大阪医科薬科大学, 医学部, 講師 (70779686)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 非アルコール性脂肪性肝炎 / 肝細胞癌 / Kupffer細胞 |
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| 研究実績の概要 |
近年、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の罹患率が上昇している。一部のNASHから肝細胞癌が発症することがとくに問題であるが、その発症機序は未だ不明であり、本邦で承認されている肝細胞癌の治療薬も一剤のみで開発に乏しい。また、様々な癌腫の発癌過程において、マクロファージのM1型からM2型への分極化が注目されており、新たな治療標的として期待されている。本研究では、肝特異的マクロファージであるKupffer細胞をNASH肝より分離し、Kupffer細胞の分極化に伴う代謝産物変化を明らかにすることを目的としている。
本年度は、動物モデル飼育に長期間を要するためin vitro実験を中心に行った。マウス由来Kupffer細胞株であるKUP5にLipopolysaccharide(LPS)を導入し分極化実験を行った。LPSを導入した細胞を回収しWestern Blotting法で解析したところ、M1型マクロファージマーカーであるCD86の上昇およびM2型マクロファージマーカーであるCD163・CD206の発現低下を認め、LPS導入によりM1型に分極することを確認した。さらに、同サンプルにおいて糖代謝経路の律速酵素であるPKM2の発現変化を確認することができた。
また、発癌前のマウスNASHモデル（C57BL/6J-NASH）ではM1マーカー遺伝子（CD86・CD80）の発現上昇およびM2マーカー遺伝子（CD163・CD206）の発現低下を認め、NASH肝ではM1型マクロファージが増加していることが示唆された。今後は、この動物モデルを長期飼育し発癌を確認したうえで上記と同様にマクロファージの分極化の確認を行う。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
LPS導入したKupffer細胞株（KUP5）においてM1型への分極と糖代謝関連遺伝子の関係性をウェスタンブロッティング法を用いて解明した。動物実験においては長期飼育中であり解析は来期行う予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
LPS導入Kupffer細胞株の代謝経路変化をより詳細に検討するためメタボローム解析・プロテオーム解析等を行っていく。
動物実験は予定飼育期間を迎えたタイミングで解剖し、発がん過程を確認したうえでKupffer細胞の分極・糖代謝経路変化の関係性をPCR・ウェスタンブロッティング法で確認する。可能であれば同サンプルを用いてメタボローム・プロテオーム解析も行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
動物モデル長期飼育中であり、本年度は解析費用が不要となった。次年度に当該費用を割り当てる予定である。
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