| 研究課題/領域番号 |
21K08867
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
末廣 晃太郎 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (10569312)
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| 研究分担者 |
上野 耕司 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (30736070)
濱野 公一 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60263787)
溝口 高弘 山口大学, 医学部附属病院, 診療助教(4日/週) (90844796)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 移植細胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、臨床研究「難治性皮膚潰瘍に対する培養ヒト自己細胞混合シートを用いた移植治療に関する臨床試験（第Ⅰ相試験）（jRCTb060190034）」（AJTR 2021;13:9495-9504）で採取した患者線維芽細胞と患者自己血清を解析することを目的にしている。
上記臨床研究では、6名の患者が登録されたが、1名の患者線維芽細胞は樹立出来なかった為に、6名の患者自己血清と5名の患者細胞が保管されている。
患者線維芽細胞は、1～4年程度保管されていたが、解凍直後の細胞生存率を確認すると、4名の患者線維芽細胞の細胞生存率は70%以上で、1名の患者線維芽細胞の細胞生存率は約60%であった。この生存率60%の患者線維芽細胞は、臨床研究時も増殖が遅い細胞であったことから、今回の結果は細胞増殖能を反映していると考えられた。
解凍後の線維芽細胞の培養に使用する血清は、NeoSERAが使用された。そして、線維芽細胞の細胞密度は高くなるまで培養した後に、細胞シートを作製した。この細胞シートを作製する時の血清は、患者自己血清およびNeoSERAを使用して、それぞれの血清を使用して細胞シートを作製した。その培養上清は、ELISA解析用とした。
細胞シートはHGFを分泌しており、自己血清とNeoSERA作製した細胞シートの分泌量を比較すると、5名の患者線維芽細胞シート全てにおいて、NeoSERAで作製した細胞シートが分泌するHGF量は、自己血清で作製した細胞シートが分泌するHGF量よりも多い結果であった。VEGF量を比較すると、自己血清で作製した細胞シートが分泌するVEGF量は、NeoSERAで作製した細胞シートが分泌するVEGF量よりも多い結果であった。IL-6は、自己血清とNeoSERAでは明確な差が無かった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
患者由来細胞と患者由来の血清を用いて、細胞シートを作製して、その培養上清中の分泌物を解析するなど、研究計画通りに実施出来ている為。
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| 今後の研究の推進方策 |
患者由来の細胞からRNAを抽出し、次世代シークエンサーで遺伝子発現を解析することで、移植に至った患者細胞と移植に至らなかった患者細胞での遺伝子発現に相違が有るか否か確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
参加した学会がweb開催の為に、旅費としての使用が無かったため。生じた残額は、遺伝子発現解析に使用する。
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