| 研究課題/領域番号 |
21K09199
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
市川 二郎 山梨大学, 大学院総合研究部, 特任准教授 (00456469)
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| 研究分担者 |
菰原 義弘 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (40449921)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 骨肉腫 / マクロファージ |
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| 研究実績の概要 |
停滞した骨軟部肉腫の化学療法を発展するために、申請者らは腫瘍微小環境を新規治療ターゲットとして、凝固系や血小板の肉腫進展への役割を報告した。それを更に発展すべく、本研究ではマクロファージ、中でもM2-腫瘍随伴マクロファージ(TAM)に着目した。癌腫におけるTAM発現の意義と治療ターゲットに関して明らかにしたが、骨軟部肉腫での役割は不明であった。我々は、CD163陽性TAMが骨軟部肉腫の増殖転移に関与すること、更にTAM作用薬の一つであるCSF-1R阻害剤のヒト骨肉腫細胞への抗腫瘍効果を確認した。本研究では、詳細なTAMの役割を解明すべく、①肉腫細胞により誘導されたTAMの分子細胞学的なプロファイリン
グ、②そのTAMが産生する液性因子とそれに対する肉腫の応答性、③TAM作用薬の肉腫への単独効果、及び既存抗がん剤との併用効果を検討し、新規治療へ発展させることを目的とする。2021年度来、TAMのマーカーに関してはM2マーカー（CD163,CD204 など）を主体にPCRで検討してきたが、細胞によりその増減が大きいため、今回はマーカーの更なる検索は一時中止とした。次いで骨肉腫上清によるＴＡＭが産生する液性因子に関しては複数候補の中からＩＬ－８を抽出した。産生の機序に関して検討し、骨肉腫上清をマクロファージに入れることで、ＰＫＣのリン酸化が上がっており、それを阻害するとＩＬ－８の産生が抑制された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
TAM由来IL-8の骨肉腫に対する作用やその詳細が検討できなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
TAM由来IL-8の骨肉腫に対する作用やその詳細を検討し、更にVivoモデルを確立する必要がある。Vivoモデルとして、①骨肉腫とTHP-1を共培養する②骨肉腫にTAM上清を加えるなどが考えられる。これらを今後検討しないと行けない。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験が予定より遅れているため、物品費が予定より少なくなった。
次年度はTAM由来のIL-8による骨肉腫への作用を検討したい。その詳細として、①細胞内シグナルの特徴、②増殖・浸潤能への効果を検討する。①に関してはFAK、SRCなどの細胞内シグナルがIL₋8によりリン酸化されるとの報告があり、そこをWBで確認した。②に関しては骨肉腫誘導TAMから得られた上清を用い、増殖はWSTアッセイ、浸潤能はMatrigel Invasion Assayで評価する。①、②の実験では、中和抗体ないし受容体阻害薬（CXCR1、CXCR2）を用いて、抑制されるかを検討する。
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