| 研究課題/領域番号 |
21K09234
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
岡田 博 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (90896721)
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| 研究分担者 |
河村 健二 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (20445076)
面川 庄平 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (70597103)
前川 尚宜 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (90596660)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 切断肢 / 液体窒素 / 組織学的変化 |
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| 研究実績の概要 |
Fisher344ラット（雄）の後肢下腿中央での切断肢の凍結および解凍方法の違いによる組織学的評価を行なった。
凍結法A法：切断肢の大腿動脈にRPMI1640培地を5分程度灌流した後、ガーゼと滅菌ゴム手袋で密閉、4℃で15時間、-20℃で4時間、-80℃で24時間保存した後、液体窒素（-196℃）に入れる緩徐凍結法。B法：切断肢をガーゼと滅菌ゴム手袋で密閉後、液体窒素につけて凍結を行う、急速凍結法。解凍法C法：45℃の0.9％ NaCl に切断肢を入れ、15分間恒温振盪水槽で解凍後、50mlのマンニトール、25,000Uのヘパリン、4mgのデキサメタゾンの溶液に室温（約20℃）で10分間入れる解凍法。D法：切断肢を42℃のRPMI1640培地の恒温振盪水槽に約5分間つけた後、大腿動脈からRPMI1640培地を1ml/分で15分間程度灌流する解凍法。AC・AD・BC・BDの4法と単純な切断肢（control）をホルマリン固定後、組織切片をHE染色し、顕微鏡下に評価を行なった。
外観上、解凍時に血管内を灌流したAD・BD法はそれ以外と比較し組織の浮腫様変化を認めた。
顕微鏡下での評価は、20倍での観察時、BC・BDと比較してAC・ADでは間質の膨化を認めた。またAD・BDは組織の破壊を認めた。400倍での観察時、皮膚はBDがcontrolと近似したが、AD・BCは基底膜の破壊が強かった。骨はいずれも核破壊は認められなかった。神経は神経周膜の離解がAC・ADよりBC・BDに強く認めた。血管に関しては凍結肢いずれも内膜損傷が認めた。筋の核の量はいずれもControlと比較して減少を認めた。
以上より、解凍法Dにおいては組織破壊性が考えられ、凍結法A法は切断後の下処理による間質の膨化が認めら、B法は神経の障害性がA法より強く、いずれの凍結解凍法においもて血管障害が生じると思われた。
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