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2021 年度 実施状況報告書

腎癌におけるlong non-coding RNAの臨床的意義の解明

研究課題

研究課題/領域番号 21K09356
研究機関慶應義塾大学

研究代表者

久冨木原 良平  慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (40837027)

研究分担者 大家 基嗣  慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 教授 (00213885)
田中 伸之  慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (60445244)
研究期間 (年度) 2021-04-01 – 2024-03-31
キーワードlncRNA
研究実績の概要

ヒトゲノムの大部分はタンパク質のアミノ酸一次配列情報をコードしないnon-coding RNAで構成されることが判明しており、その中で200塩基以上のものはlong non-coding RNA(lncRNA)と呼ばれている。種々の癌でlncRNAとの関連が報告されているが、まだ不十分な状況である。本研究では、分子標的治療・免疫チェックポイント阻害薬の先駆的な立場である腎癌とlncRNAの関連を調べることを目的とした。
核内のlncRNAは染色体構造や遺伝子の転写、スプライシングに関わり、細胞質内のlncRNAはmRNAの移動や安定に関与していることがわかっており、lncRNAの細胞内局在は機能解析において重要な情報であると考えられる。先行研究にて、HOTAIR、TUG1、CDKN2B-AS1の3種のlncRNAにおいて腎癌予後との関連を認めており、これらのlncRNAの細胞内局在を調べることで、lncRNAの機能解析を進めることとした。
まず計画1に則って、新規RNA detecting systemであるin situ hybridization chain reactionと、膨張顕微鏡法(Expansion microscopy)を併用することで、lncRNAの細胞内局在を調査した。薄切した腎癌組織にhydrogel polymerを浸透させたのち、probeを標的のRNAに標識させシグナルを増幅するチェインを連ならせ、最後に水につけることで、細胞骨格を保ったまま直線方向に2~3倍に膨張した組織の観察に成功した。これにより、回折限界を超えたナノスケールでの観察が可能となった。従来のhybridization chain reactionと比較しても、一つ一つのシグナルが離れることでその数を数えることができ、細胞内局在の定量的な発現評価が可能であった。
実際に10個の腎癌細胞においてHOTAIRのsignalを集計した。核外よりも有意に核内に多く発現しており(p=0.001)、核小体内外では明らかな発現の差は認めなかった(p=0.297)。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

新規RNA detecting systemであるin situ hybridization chain reactionは先行研究にて施行可能であったが、膨張顕微鏡法(Expansion microscopy)との併用は難渋した。薄切の厚さを調節したり、スライドの種類を変更したりして、成功に至った。

今後の研究の推進方策

先行研究にて、腎癌予後との関連を認めたHOTAIR、TUG1、CDKN2B-AS1における腎癌組織内の局在を明らかにしていく。in situ hybridization chain reactionと膨張顕微鏡法の併用にて、定量的なlncRNA発現の局在評価を進める。
さらに計画2に基づいて、腎癌検体のDNA変異と、lncRNA発現についても調査を進める。

次年度使用額が生じた理由

in situ hybridization chain reactionと膨張顕微鏡法の併用に難渋し、当該年度は腎癌組織をDNA解析に回すまでに至らなかったため次年度使用額が生じた。次年度は現在行っている定量的なlncRNA発現の局在評価を進めるとともに、計画2に基づいて、腎癌検体のDNA変異とlncRNA発現についても調査を進める。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2022 2021

すべて 学会発表 (2件)

  • [学会発表] In situ hybridization chain reactionとexpansion microscopyを組み合わせた腎癌long non-coding RNA可視化の試み2022

    • 著者名/発表者名
      久冨木原良平
    • 学会等名
      第31回泌尿器科分子細胞研究会
  • [学会発表] In situ hybridization chain reactionを用いた、腎癌におけるlong non-coding RNAの臨床的意義の解明2021

    • 著者名/発表者名
      久冨木原良平
    • 学会等名
      第59回日本癌治療学会学術集会

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公開日: 2022-12-28  

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