| 研究課題/領域番号 |
21K09448
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
三宅 達也 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (00814766)
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| 研究分担者 |
岡本 一起 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい准教授 (40177085)
瀧内 剛 大阪大学, 大学院医学系研究科, 特任准教授(常勤) (40733358)
木村 正 大阪大学, 大学院医学系研究科, 教授 (90240845)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | NF-κB / MTI-Ⅱ / 6A-8R / 着床阻害 |
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| 研究実績の概要 |
令和4年度には、着床前マウスへのMTI-Ⅱの活性部位を利用したペプチド（6A-8R）投与による着床の検討を行った。6A-8Rは将来の臨床での使用を想定して、妊娠2.5日より連日経膣投与(2.5mg/回、1日3回)し、妊娠4.5日にEvans-blueを尾静注し、着床数・着床の有無を計算した。その結果、6A-8Rを投与した妊娠マウスは非6A-8R投与マウスに比して、着床部・着床数を減じ、有意に着床阻害効果を認めた。この妊娠マウスの子宮を用いてmRNAをリアルタイムPCRで測定し、炎症性サイトカインであるIL-1α,IL-1β,TNF-α,COX2はやや抑制効果を示したが、着床関連遺伝子とされるLIF,Wnt,Aregは明らかな有意差を認めていない。また、同様の条件の妊娠マウス子宮を用いて、着床に必須の分子であるpSTAT3/STAT3を検証したが、明らかな有意差を認めていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
着床前マウスへの6A-8R連日経膣投与による着床阻害効果の検討を行った。妊娠マウスを作成し、6A-8R投与するスケジュールを組み、着床評価を行った。6A-8Rを投与した妊娠マウスは非6A-8R投与マウスに比して、着床部・着床数を減じ、有意に着床阻害効果を示した。現在、6A-8R投与妊娠マウス、非6A-8R投与妊娠マウスの２群に分け、その評価を継続している。妊娠3.5日、4.5 日、5.5日のマウスの子宮を用いてmRNAをリアルタイムPCRで測定し、IL-1α,IL-1β,TNF-α,COX2などの炎症性サイトカインはやや抑制効果を示したが、着床関連遺伝子とされるLIF,Wnt,Aregは明らかな有意差を認めていない。また、同様の条件の妊娠マウス子宮を用いて、着床に必須の分子であるpSTAT3/STAT3を検証したが、明らかな有意差を認めていない。
令和５年度はマウス生体内投与による、子宮組織の着床関連遺伝子・分子の発現評価、脱落膜化の評価を病理学的に評価する。また、細胞添加実験も並行して行う予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
6A-8R投与妊娠マウス、非6A-8R投与妊娠マウスに対して、6A-8Rを投与することでの子宮の脱落膜化の評価(病理学的評価)を行う。明らかな有意差を認めない着床関連遺伝子が多いため、RNAシーケンスを用いて取得したリードの情報をデータ解析することを検討している。
動物実験に並行して、ヒトESC(HESC：正常子宮内膜間質細胞)に対し、6A-8Rを添加することで脱落膜化が阻害されるか、またHESCを脱落膜化誘導後に6A-8R を投与し、PRLとIGFBP-1＋MTI-II primerといった脱落膜化マーカーや着床関連遺伝子（STAT-3, LIF, NF-κB、COX-2など）の発現を測定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
物品費や旅費が当初計画より抑えられたため、残額が生じた。この残額は令和5年度分の助成金と合わせ、研究に必要な消耗品購入や精子の観察サンプルの作製費、研究成果を発表する学会参加費や論文投稿費として使用する予定である。
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