| 研究課題/領域番号 |
21K09478
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
片山 映 日本医科大学, 医学部, 助教 (10333113)
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| 研究分担者 |
桑原 慶充 日本医科大学, 医学部, 准教授 (40373013)
杉田 洋佑 日本医科大学, 医学部, 助教 (60774354)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | ネオ・セルフ / 自己免疫疾患 / 不育症 / SN-APS / MHCクラスⅡ / 抗リン脂質抗体症候群 / iPS細胞 / 血管内皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
自己免疫疾患の臨床所見を示す不育症患者の一部には、血清学的陰性リン脂質抗体症候群(SN-APS)が含まれ、未知の自己抗体の関与が示唆されている。不育症の病因である抗β2グリコプロテインⅠ抗体は、ネオ・セルフ抗体産生機構由来であり、未知の自己抗体が同機構により産生されている可能性がある。そこで、本研究では、SN-APS患者において、ネオ・セルフ抗体産生機構に基づいた、未知の自己抗原の探索と、その検出法の確立を行った。
ネオ・セルフ抗体は、非免疫細胞である血管内皮細胞等で抗原提示されることに起因している。ヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC)での検討では、炎症刺激(INFγ)により抗原提示を行う主要組織適合遺伝子複合体(MHC)クラスII分子の発現と、提示された抗原タンパク質の同定の条件を確立した。
そこで、SN-APS患者由来のiPS細胞を、血管内皮細胞へ分化し、炎症刺激によって提示されるタンパク質の検出法の確立を目的として、まずiPS化済みの細胞を用いた検討を行った。由来の異なる3種のiPS細胞を分化誘導した血管内皮細胞では、表面抗原マーカーでは高純度ではあるが、MHCクラスII分子の発現が不十分で、分化後の成熟化に伴いMHCクラスⅡ発現の低下が見られた。このため、中胚葉への分化時の純度を検討し、血管内皮細胞分化後の均一性の向上を進めた。
次に、SN-APS患者由来の血管内皮初代培養細胞によるMHCクラスII発現と抗原タンパク質同定を検討した。血管内皮細胞は流産検体の脱落膜より、磁気ビーズにより分離、培養を行った。培養初期では血管内皮細胞の割合が優勢であるが、混入する線維芽細胞の増殖速度が速く、磁気ビーズによる複数の純化処理と、線維芽細胞の除去処理によっても、十分な血管内皮細胞を得ることが出来ず、抗原タンパク質の同定と、不死化の操作に至らなかった。
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