網膜における血管内皮コロニー形成細胞の同定およびその微小環境の解明

2021 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 21K09674
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 崎元 晋 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (60633047)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: 網膜血管 / 血管内皮コロニー形成細胞 / 血管内皮細胞 / 糖尿病網膜症

研究実績の概要

血管内皮コロニー形成細胞（Endothelial colony-forming cells: ECFCs）は、細胞治療に用いるヒトないしは自家血管内皮細胞のソースとして知られているが、近年広義のECFCとして、生体内における血管内皮幹/前駆細胞の存在が注目されている。申請者は、最近報告されているCD157、CD201などのマーカーに着目し、網膜血管におけるECFCの同定とニッチ環境の解明を計画している。マウス網膜血管内皮細胞を用いたシングルセルRNAseq解析結果を用い、特定のクラスターに発現する遺伝子の機能解析を行った。遺伝子Aおよび遺伝子Bのノックダウンを、培養血管内皮細胞（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）、マウス脳血管内皮細胞（bEND3）、ヒト網膜血管内皮細胞（HRMEC））に行い、増殖活性、遊走活性、血管新生能を検討した。増殖活性はMTTアッセイ、遊走活性はスクラッチアッセイ、血管新生能はtube-formation assayを行った。遺伝子Aのノックダウンでは、上記アッセイにて明らかな変化を認めなかったが、遺伝子Bをノックダウンした細胞では、MTTアッセイにて細胞増殖は亢進しており、tube-formationアッセイでもネットワーク形成能が亢進していた。また遺伝子Bをレンチウイルスを用いてHUVECにて過剰発現させると、増殖活性の低下が認められた。今後遺伝子A、Bのin vivoにおける機能解析を行っていく予定である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

上記の通り、特定遺伝子の機能解析を行い興味深い結果が得られている。

今後の研究の推進方策

今後遺伝子A、Bのin vivoにおける機能解析を行っていく予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Analysis of Progressive Neovascularization in Diabetic Retinopathy Using Widefield OCT Angiography. (2022)
  • 著者名/発表者名: Shiraki A, Sakimoto S, Eguchi M, Kanai M, Hara C, Fukushima Y, Nishida K, Kawasaki R, Sakaguchi H, Nishida K.
  • 雑誌名: Ophthalmol Retina. 巻: 5 ページ: 153-160
  • DOI: 10.1016/j.oret.2021.05.011.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Flow pattern and perforating vessels in three different phases of myopic choroidal neovascularization seen by swept-source optical coherence tomography angiography. (2021)
  • 著者名/発表者名: Sayanagi K, Hara C, Fukushima Y, Sakimoto S, Kawasaki R, Sato S, Ikuno Y, Sakaguchi H, Nishida K.
  • 雑誌名: Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 巻: 259 ページ: 2615-2624
  • DOI: 10.1007/s00417-021-05134-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association of disorganization of retinal inner layers with optical coherence tomography angiography features in branch retinal vein occlusion. (2021)
  • 著者名/発表者名: Kanai M, Shiozaki D, Sakimoto S, Shiraki A, Hara C, Kawasaki R, Sakaguchi H, Nishida K.
  • 雑誌名: Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 巻: 259 ページ: 2897-2903
  • DOI: 10.1007/s00417-021-05168-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term outcomes of intravitreal activated protein C injection for ischemic central retinal vein occlusion: an extension trial. (2021)
  • 著者名/発表者名: Hara C, Kamei M, Sakaguchi H, Matsumura N, Sakimoto S, Suzuki M, Nishida K, Fukushima Y, Nishida K.
  • 雑誌名: Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 巻: 259 ページ: 2919-2927
  • DOI: 10.1007/s00417-021-05072-9.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reconnection of the Severed Vein in Proliferative Diabetic Retinopathy. (2021)
  • 著者名/発表者名: Shiraki A, Sakimoto S, Nishida K.
  • 雑誌名: Ophthalmol Retina. 巻: 6 ページ: 887
  • DOI: 10.1016/j.oret.2021.06.004.
  • 査読あり