|
血管内皮コロニー形成細胞（Endothelial colony-forming cells: ECFCs）は、細胞治療に用いるヒトないしは自家血管内皮細胞のソースとして知られているが、近年広義のECFCとして、生体内における血管内皮幹/前駆細胞の存在が注目されている。申請者は、最近報告されているCD201などのマーカーに着目し、網膜血管におけるECFCの同定とニッチ環境の解明を計画している。前年度に引き続いて、CREBファミリーに属するストレス応答転写因子である遺伝子Aの網膜血管リモデリング機構に関わる解析を行った。野生型マウスの網膜血管発生期、虚血性網膜症モデルの血管新生期にてフローサイトメトリーにて網膜血管内皮細胞を単離、遺伝子Aの発現をqPCRで検討した。また遺伝子Aノックダウン（KD）ヒト網膜血管内皮細胞を用いて、血管新生アッセイにて機能解析を行なった。さらに、遺伝子A floxマウスとCdh5-Creマウスを交配した血管内皮特異的遺伝子Aノックアウト（KO）マウスを作製し、ATF3KOマウスの網膜血管発生期を免疫組織学的に解析した。血管発生期（P5）および虚血性網膜症モデル（P17）ではコントロール群と比較して血管内皮細胞での遺伝子Aの発現が有意に上昇した（P＜0.01、P＜0.05）。遺伝子AのKD細胞の血管新生アッセイでは血管密度が有意に減少した（P＜0.05）。遺伝子A KOマウスの網膜フラットマウント免疫染色では、網膜血管発生期において血管伸長が有意に減少した（P＜0.05）。さらにOIRモデルでは、P17での無血管野が増大していた(p<0.05)。以上から、血管内皮細胞に発現する遺伝子Aは網膜血管構築に関わることが示唆された。
|
