| 研究課題/領域番号 |
21K09971
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
石山 希里香 東北大学, 歯学研究科, 助教 (20712904)
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| 研究分担者 |
菅野 太郎 東北大学, 歯学研究科, 教授 (30302160)
中村 圭祐 東北大学, 歯学研究科, 准教授 (30431589)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 創傷治癒 / プロアントシアニジン / ポリフェノール |
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| 研究実績の概要 |
初年度は、0.5 gm/mLで調製したプロアントシアニジン水溶液による60秒間処理のin vitro創傷治癒促進効果の優位性を実証することができなかった。そこで、今年度は、濃度と処理時間を変えて同様の実験を行った。プロアントシアニジンの濃度を0.25, 0.5, 1.0, 2.0 mg/mLとし、処理時間を60秒間、120秒間、180秒間とした。プロアントシアニジン（Leucoselect, Indena）を生理食塩水に0.5 mg/mLとなるように溶解し、0.2 umのフィルターで除菌後、細胞試験に用いた。CytoSelect Wound Healing Assay kit（Cell Biolabs）を用いて、24-wellセルカルチャープレートにモノレイヤー創傷モデル（0.9 mm幅の一定のギャップ）を作製した。ハムスター肺由来線維芽細胞（V79）およびマウス線維芽細胞（3T3-L1）を用いて創傷モデルをプロアントシアニジン溶液で処理後、新しい培地をウェルに入れて培養を行った。処理後24時間で位相差顕微鏡を用いて創傷部位（ギャップ）の閉鎖を観察してImage Jを用いた画像解析を行い、創傷部位の閉鎖率を決定した。その結果、プロアントシアニジン処理によるいずれの細胞の創傷モデルにおいても創閉鎖率に有意な差は認められなかった。そこで、プロアントシアニジンに加えて他のポリフェノール水溶液（生理食塩水に溶解）を用いた実験を追加で実施した。実験には、水溶性ポリフェノールである没食子酸、カフェイン酸、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートを用いた。0.5 mg/mLのカフェイン酸による60秒間処理で創閉鎖率がコントロール（生理食塩水処理）よりも高くなる傾向が認められた。今後、再現性を確認しin vivo創傷モデルで用いるポリフェノールの選択と処理条件の最適化を実施する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
プロアントシアニジンによる細胞増殖促進効果（創傷治癒促進効果）がin vitroの試験で認められず、処理条件の幅広い検討を行っているため研究の進捗に遅れが生じている。プロアントシアニンジンのみならず、植物由来のポリフェノールによる効果を検証してきたが、想定している効果が明確には認められていない。今後も類縁物質を用いて創傷治癒を促進させるための処理条件の探索を行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
研究分担者と協力し、これまでよりも多くの処理条件を試験しすることでin vitro創傷モデルで創閉鎖促進効果を示すポリフェノールのスクリーニングを行う。研究分担者とは定期的に報告会を実施して情報共有を行い課題解決に取り組む。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初想定していたようなプロアントシアニジンの創閉鎖効果をin vitro試験で実証できていないため、その後に計画しているin vivo試験に移行できない状況である。従って、動物実験実施のために計上していて費用に未使用分が生じた。今後、動物実験の実施を計画しているのでそこで未使用分の研究費を使用して研究を実施する予定である。
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