| 研究課題/領域番号 |
21K10031
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
横山 愛 日本大学, 松戸歯学部, 講師 (70610252)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 唾液腺 / 機能回復 / アミラーゼ |
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| 研究実績の概要 |
高齢者は唾液分泌量が減少することが知られており、口腔乾燥症（ドライマウス）がみられる。分泌量が減少する理由は種々あるが、その１つに加齢的変化がある。唾液腺を産生する腺房細胞は加齢により萎縮する。その結果、分泌量が減少する。マウスやラットにおいて、腺房細胞の萎縮は唾液腺への放射線照射や排泄導管の結紮など、唾液腺への傷害で観察することができる。傷害が軽度な場合や傷害を取り除くと、萎縮していた腺房細胞が回復する現象が観察できる。この現象に注目し、本研究では唾液腺傷害モデルマウスを作製し腺房細胞を萎縮させ、傷害を解除後に回復する腺房細胞の遺伝子発現変化を検索することで回復メカニズムを明らかにし、萎縮した腺房細胞を回復させる因子を同定することで、加齢による口腔乾燥症の改善に役立てたい。
前年度に報告したように、唾液の傷害後に傷害を解除し唾液分泌量を測定して回復の状態を検索することが上手く行かなかったので、本年度は耳下腺から分泌される消化酵素であるアミラーゼを唾液腺の機能回復マーカーとして使用することとした。まず、耳下腺片側排泄導管をマイクロクリップにて結紮し、７日目に耳下腺を摘出した。アミラーゼがコントロールと比較して減少することをウェスタンブロッティング法で確認した。次に、結紮７日目にクリップを解除し、７日目と14日目に耳下腺を摘出し、アミラーゼの発現を検索した。コントロールと比較して、解除後７日目ではコントロールの方がアミラーゼの発現が高い傾向が観察され、14日目ではコントロールと同様程度までアミラーゼの発現が回復した。従って、傷害解除後14日までに回復現象が起こっていると考え、タイムポイントを最大14日として、どのタイムポイントで大きな変化が見られるか検討することとした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
研究計画調書の予定では令和４年度(以降）にはDNAマイクロアレイを行っている予定であったが、本年度にまだマイクロアレイまで進めていないのでやや遅れていると判断した。理由としては、前年度の遅れが影響しているためである。マイクロアレイのサンプル回収時期の決定を行うために、回復の程度を検討するため唾液分泌量の測定を試みたが前年度に上手く行かなかったため、本年度は回復の指標としてアミラーゼを用いることを試みた。アミラーゼが唾液腺の機能回復の指標になるかを検討するために傷害された唾液腺でアミラーゼが減少すること、回復時にアミラーゼが増加することを確認し、アミラーゼで回復の状態が観察できることを確認した。また、アミラーゼが唾液腺傷害後に回復するまでに１週間では不十分であり、２週間という時間がかかるのも現在の進歩状況がやや遅れてしまった原因の１つであると考える。傷害を１週間与え、その後２週間という時間がかかるので１つの実験で３週間を要する。最初につまずいてしまうと挽回が大変困難である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は提出した研究計画調書に沿って、引き続き研究を進めていく。本年度にアミラーゼを用いて唾液腺の機能回復程度が観察できることが明らかとなった。従って、片側耳下腺排泄導管に７日間の傷害を与えた後に傷害を取り除き、その後1日目から14日目までのタイムポイントで耳下腺を摘出し、アミラーゼの検出を行いアミラーゼの発現変化を観察する。各タイムポイントのサンプルとコントロールとを比較して統計処理を行い、アミラーゼの発現に最も変化があるタイムポイントが傷害解除後何日目かを検索する。最も変化のあるタイムポイントを決定後、再度前述した方法で動物実験を行い、決定したタイムポイントでサンプルを回収しマイクロアレイ解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由は、１つは「やや遅れている」と進歩状況に記載したとおり、令和４年度に予定していた研究が計画通りに進めることができなかったからである。従って、本来であれば購入予定であったマイクロアレイ関連試薬などを購入していないのが理由である。また、令和4年度の予算として計上していた第100回日本生理学会の開催地が研究計画調書を提出した際には不明であり予算が不足にならないように金額を設定したのも一因である。
使用計画としては研究計画調書に記載した通りに実験を行う予定であるため、次年度使用額は、マイクロアレイ関連試薬やプラスチック製品に使用する予定である。
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