| 研究実績の概要 |
アデノウイルス初期プロモーター（E4) Luciferase上流にNanogプロモーター配列(7788525-7789557: NC_000012.12)をクローニングし、HeLa細胞を用いて、山中４因子（Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc）の強制発現によるルシフェラーゼ発現変化を検討した。この実験では、山中４因子のうちOct3/4, Sox2がルシフェラーゼ発現を有意に抑制した。この配列をアデノウイルスE４プロモーターの上流に組み込んだところ、Oct3/4, Sox2によるE4プロモーターの抑制効果はキャンセルされ、このようなプロ―モータ領域を有するヒトアデノウイルスE4領域の転写は野生型に比較してKLF4により有意に活性化される可能性が示唆された。E4領域の転写はアデノウイルス増殖に必須であるが、感染初期に自然免疫応答にて活性化されるNF-ｋBとE4タンパク質の関りについての検討においてはE4orf4が直接結合することにより、E4orf6/7がE2F4を介することによりNF-ｋBの転写活性化能を抑制することが明らかとなった。GFP-LC3を導入したHeLa細胞に野生型アデノウイルスを感染させると、感染に時間後には顕著に観察されるLC3の顆粒状構造が感染16時間後にはほとんど消失することが明らかとなった。E1B19K標的タンパク質とp62/SQSTM1との結合についての解析では、BNIP1が主要な結合パートナーでありBNIP3はSQSTM1との結合性を示さなかった。一方、LC3との結合性を同様なTwo Hybrid法で検討してみると、ここではBNIP3のみが顕著な結合性を示した。
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