| 研究課題/領域番号 |
21K10239
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
田中 とも子 日本歯科大学, 生命歯学部, 准教授 (70307958)
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| 研究分担者 |
八重垣 健 日本歯科大学, 生命歯学部, 教授 (40166468) [辞退]
堀江 哲郎 日本歯科大学, 生命歯学部, 講師 (10508675)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | バイオフィルム / Red Complex / 歯周病 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は最終目的を口腔常在菌のreplaceによるバイオフィルム形成抑制効果を利用した歯周病予防ツール開発として行っている。
本年度はバイオフィルムの作製を行った。使用菌株はRed complexを構成する Porphyromonas gingivalis（P. g） 、Tannerella forsythia (T. f)、Treponema denticola (T. d)の３菌種、Fusobacterium nucleatum（F. n）とS.gordonii (S. g)を用いた。本実験に適した0.1％ acetylmuramic acid添加TYVGS培地を作製した。
人工バイオフィルム作製は次のように行った。調製した５菌種共通の液体培地で培養後、菌数を分光光度計で測定し、等張りん酸緩衝液にて濃度をOD1.5に調整、各細菌懸濁液とした。ヒト唾液による人工的ペリクル加工済みヒトエナメル質を設置した容器内にS.gの懸濁液を満たし、24時間培養した。次いで懸濁液を除去し、P. g、T. f、T. dとF.nの懸濁液を容器内に入れ、さらに嫌気条件下で48時間培養した。作製した人工バイオフィルムをSEMにて観察し、用いた５菌種から人工バイオフィルムを作製できたことを確認した。今後、菌叢解析により人工バイオフィルムの経時的変化を測定し、実験に適した条件を検討する予定である。そのために、培養液中でのODと各細菌数との関係を確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
コロナ禍により必要な実験材料が入手不可能になったり、大幅に遅延して納品されたことや研究時間の短縮、研究場所の縮小などが余儀なくされ作業効率が悪くなったこと、共同研究者が急逝したことなどから研究が予定より遅れてしまった。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、2021年度研究計画に従い、S. g. ATCC10558、F. n. ATCC 25586 、P. g. ATCC 33277、 T. f. ATCC 43037および T. d. ATCC 35405から作製した人工バイオフィルムを用いて菌叢解析を行い、実験に適した人工バイオフィルムの条件を明確にしていく。
また、次のステップに用いる歯周病予防に効果があるとされるStreptococcus cristatus、Veillonella atypicaの培養法を確立する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2021年度の研究に遅れが生じたため使用期限を最大限長くし、実験回数を多くする目的で、購入時期を次年度にずらしたため、生じた次年度使用額である。2022年度の予定した実験と並行して、2021年度にやり残した16SrRNA遺伝子による菌叢分析を組み込み、効率のよい研究計画を再考した。使用計画に問題はないと考えている。
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