| 研究課題/領域番号 |
21K10406
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| 研究機関 | 金城学院大学 |
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研究代表者 |
内藤 久雄 金城学院大学, 生活環境学部, 教授 (90547556)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | NASH / 肝線維化 / 高血圧 / プロテオーム |
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| 研究実績の概要 |
先行研究により、高脂肪・高コレステロール飼料（HFC）摂取により引き起こされるラットの肝炎・線維化は、肝臓内への胆汁酸の蓄積が壊死・線維化に進展していることが判明しており、その要因の一つとして高血圧がある。
昨年度行った実験のうちの ② 8週齢の雄SHR/Ismを4群(各群6匹)に分け、2群に降圧剤ヒドララジン(60 mg/L)を2週間投与（順化）し、残りの2群は通常飼料のみとする。10週齢に達したところで、a) 降圧剤+HFC群、b) 降圧剤+コントロール飼料群、c) HFC群、d)コントロール飼料群とし、8週後(18週齢)で解剖し、各肝臓サンプル(各群4サンプル使用）から、RIPA Bufferを用いて肝ホモジネートを作成した。
次に各ホモジネートを蛋白濃度を測定し、調整後、藤田医科大学にある次世代質量分析装置(Orbitrap fusion)でプロテオーム解析を行った。プロテオーム解析により、高血圧・脂質摂取による肝炎・線維化と関連するマーカーを探索し、近年NASH（肝がん）の新規バイオマーカーとして注目されているCD44が検出され、HFC8週摂取群はコントロール8週摂取群より100倍以上高値であった。また、降圧剤によりHFC+降圧剤群/HFC群比は0.75とやや改善傾向を認めた。しかし、主成分分析から各群の傾向をみたところ、降圧剤の影響は小さかったが、詳細な解析はまだ行っていない。次年度に解析してく予定である。
また、解析により抽出された蛋白について、Western Blot法により、各群6匹での解析を行っていく。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
コロナ感染症における教育関係の対応など負担が多くなり、実験をする時間の確保が難しかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、昨年度報告した実験①の幼少期ラットの肝臓サンプルからDNAを抽出し、次世代シークエンサーにてCyp7a1プロモーター領域のDNAメチル化頻度の解析を行う。また、プロテオーム解析について、高血圧の有無による差が小さいため詳細な解析を今後行い、降圧剤に関連して変化ったのあった蛋白の解析を行っていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験及びその解析が遅れており、実験に必要な試薬・消耗品を購入していないため。
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