| 研究課題/領域番号 |
21K11657
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
目崎 喜弘 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (40431621)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 肝星細胞 / クッパー細胞 / 肝類洞内皮細胞 / 蛍光ビーズ / 免疫組織化学 / ラット |
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| 研究実績の概要 |
蛍光ビーズを注入したラット肝臓標本の免疫組織化学染色を行い、蛍光ビーズのシグナルと重ね合わせて評価した。用いた抗体は、抗アルブミン抗体、抗stabilin-2抗体、抗F4/80抗体、抗CD68抗体、抗レシチン：レチノールアシルトランスフェラーゼ（LRAT）抗体、抗Desmin抗体、抗細胞内レチノール結合タンパク質I（CRBP I）抗体である。抗アルブミン抗体は肝実質細胞、抗stabilin-2抗体は肝類洞内皮細胞、抗F4/80抗体と抗CD68抗体はクッパー細胞、抗LRAT抗体、抗Desmin抗体と抗CRBP I抗体は肝星細胞のマーカーである。蛍光ビーズは直径20 nmのものと500 nmのものを用いた。その結果、直径20 nmの蛍光ビーズは、類洞内腔のクッパー細胞に取り込まれるとともに、類洞周囲腔に存在する肝星細胞にも取り込まれることが明らかとなった。一方、直径500 nmの蛍光ビーズは、類洞内腔にとどまり、クッパー細胞にのみ取り込まれた。興味深いことに、肝星細胞やクッパー細胞とともに、肝小葉内で盛んな貪食能を持つ細胞として知られている肝類洞内皮細胞は、径の大きい蛍光ビーズも径の小さい蛍光ビーズも全く取り込まなかった。肝類洞内皮細胞の異物貪食は、受容体介在型のエンドサイトーシスによって行われていることが知られており、今回用いた蛍光ビーズを取り込まない原因と考えられた。肝類洞内皮細胞のfenestrationを通過する大きさの蛍光ビーズと通過しない大きさの蛍光ビーズを用いることにより、肝星細胞とクッパー細胞を異なる蛍光で標識することが可能となった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
肝線維化の責任細胞である肝星細胞を蛍光ビーズにより特異的に標識することが可能となったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今回開発した肝星細胞を特異的に標識する技術と組み合わせて、肝星細胞の活性化過程におけるレチノイン酸受容体の機能の詳細を明らかにする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額の34,674円は、継続的な消耗品購入の過程で、伝票処理のタイムラグの結果として繰り越されたものである。
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