| 研究課題/領域番号 |
21K11663
|
|---|
| 研究機関 | 帝塚山学院大学 |
|---|
研究代表者 |
楠堂 達也 帝塚山学院大学, 人間科学部, 准教授 (00460535)
|
|---|
| 研究分担者 |
向井 貴子 帝塚山学院大学, 人間科学部, 助手 (60701464)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| キーワード | FABP / 脂肪酸結合タンパク質 / 細胞外生理作用 |
|---|
| 研究実績の概要 |
本研究では、FABP1とFABP3をターゲットとして、マウスへの組換えFABPタンパク質の投与実験や、抗FABP抗体投与による中和実験によって、FABPsの内分泌因子としての働きを解明し、生活習慣病の病態形成に果たす役割を明らかにする。具体的には、下記３項目を柱として研究を行う。(1) FABP1とFABP3タンパク質投与による、生理応答の検討、(2) 血中FABP1とFABP3低下による、生理応答の検討、(3) 培養細胞系を用いたFABPsの細胞外作用とメカニズムの解析。
初年度の令和３年度は、(1)、(3)に必要なFABP1、3の発現系の構築と精製を行った。我々はHisタグのついたFABP1、3の発現・精製系を既に確立していたが、本研究においては、Hisタグが生理作用や細胞取り込みに影響する可能性が否定できない。そこで、タグの無いFABP1、3の発現系、および精製系の構築を行った。大腸菌発現ベクターpET-21からHisタグ部分を取り除いたpET-21(ΔHis)を作製し、マウスFABP1、3遺伝子を繋いだ。作製したベクターを大腸菌BL21(DE3)株に導入し、発現を誘導した所、FAPB3は発現したが、FAPB1は発現が見られなかった。そこで、FABP1に関して、大腸菌発現ベクター（３種類）、宿主大腸菌（４種類）、培養温度（25℃、37℃）を組合せ、検討を行った。その結果、このうち１つの組合せにおいて、FABP1の発現が見られた。現在、これらタグの無いFABP1、3の精製を終え、(3)の培養細胞系を用いたFABP1、3の細胞外作用を検討している。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究では、(1) FABP1とFABP3タンパク質投与による、生理応答の検討、(2) 血中FABP1とFABP3低下による、生理応答の検討、(3) 培養細胞系を用いたFABPsの細胞外作用とメカニズムの解析の３つを柱として研究を進める計画である。初年度の令和３年度は、(1)～(3)全てに必要なFABP1、3の発現系の構築と精製を行った。FABP1の発現系構築に時間を要したため、抗体の作製、動物への投与実験など、少し遅れはしているが、(3)の培養細胞系を用いた実験まで進められており、おおむね順調である。
|
| 今後の研究の推進方策 |
令和４年度も、当初計画に従い、(1) FABP1とFABP3タンパク質投与による、生理応答の検討、(2) 血中FABP1とFABP3低下による、生理応答の検討、(3) 培養細胞系を用いたFABPsの細胞外作用とメカニズムの解析の３つを柱として研究を進めていく。(1)については、マウスに組換えFABP1、3を投与し、糖・脂質代謝に与える影響を検討する。(2)については、実験で用いる中和抗体の作製を行う。(3)については、脂肪細胞のモデルである3T3-L1細胞、褐色脂肪細胞のモデルであるC3H10T1/2細胞、筋肉細胞のモデルであるC2C12細胞を用いて、FABP1、3の添加実験を行い、分化や糖・脂質代謝に与える影響を検討する。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
理由：FABP1、3の発現・精製の遅れにより、初年度予定していた抗体作製、動物実験に遅れが生じ、次年度使用額が生じた。
使用計画：抗体作製、動物実験に充てる。
|
