ヒト樹状細胞前駆細胞株とT細胞クローンを用いた新規アレルギー感作性評価法の開発

2023 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21K12256
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 溝口 出 東京医科大学, 医学部, 講師 (00569527)
• 研究分担者: 善本 隆之 東京医科大学, 医学部, 教授 (80202406)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: アレルギー感作性 / 動物実験代替法 / Th2細胞株 / 単球細胞株 / 呼吸器感作性

研究実績の概要

本年度は、汎用性を改善するため、プリマリーのヒトナイーブCD4+T細胞の代わりに、ヒト単球株CD14-MLとヒトTh2細胞株を用いた2ステップ3次元DC/T共培養系の確立とその有効性について検討を行った。
①T細胞株の作製：単球株CD14-ML由来DCをLPS刺激で成熟化し、ヒトアロ反応性CD4+T細胞をTh1およびTh2分化条件で頻回刺激を繰り返し、アロ抗原特異的Th1/Th2細胞株を作製し、IFN-gとIL-4の産生をELISAで確認した。現在、限界希釈法により、さらに、Th1/Th2細胞クローンを作製中である。
②単球株CD14-ML由来未成熟DCとT細胞株を用いた2ステップ3次元DC/T共培養系の構築：単球株CD14-ML由来未成熟DCと上述のアロ抗原特異的Th2細胞株を用いて、DC/T共培養系に応用し、代表的な呼吸器感作性化学物質としてOrtho-phthaldialdehyde（OPA）と代表的な皮膚感作性化学物質としてOxazolon（OXA）を用いて刺激すると、48時間後の培養上清のELISAにより、IL-4産生がOXAに比べOPA刺激で強く、IL-2産生は両者で変わらず、IFN-g産生はOXAに比べOPA刺激で低い傾向であった。
③複数の感作性化学物質での検討：さらに、2つずつの代表的な呼吸器感作性化学物質としてOrtho-phthaldialdehyde（OPA）とOxazolon（OXA）、代表的な皮膚感作性化学物質としてFormaldehyde (FA)と2,4-Dinitrochlorobenzene (DNCB)を用いて同様に刺激しても、いずれも皮膚感作性化学物質に比べ、呼吸器感作性化学物質でIL-4産生が高く、両者の識別が可能である可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Development of an in vitro sensitization test using a coculture system of human bronchial epithelium. (2023)
  • 著者名/発表者名: Tanabe I, Yoshida K, Ishikawa S, Ishimori K, Hashizume T, Yoshimot T, Ashikaga T.
  • 雑誌名: Altern Lab Anim. 巻: 51(6) ページ: 387-400
  • DOI: 10.1177/02611929231204823
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A promising needle-free pyro-drive jet injector for augmentation of immunity by intradermal injection as a physical adjuvant. (2023)
  • 著者名/発表者名: Sonoda J, Mizoguchi I, Inou S, Watanabe A, Sekine A, Yamagishi M, Miyakawa S, Yamaguchi N, Horio E, Katahira Y, Hasegawa H, Hasegawa T, Yamashita K, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Int J Mol Sci. 巻: 24(10) ページ: 9094
  • DOI: 10.3390/ijms24109094
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Potent antitumor effects of the conditioned medium of bone marrow-derived mesenchymal stem cells via IGFBP-4. (2023)
  • 著者名/発表者名: Furusaka Y, Inoue S, Mizoguchi I, Hasegawa H, Katahira Y, Watanabe A, Sakamoto E, Sekine A, Miyakawa S, Umezu T, Owaki T, Yoneto T, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 114(6) ページ: 2499-2514
  • DOI: 10.1111/cas.15789
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Induction of potent antitumor immunity by intradermal DNA injection using a novel needle-free pyro-drive jet injector. (2023)
  • 著者名/発表者名: Inoue S, Mizoguchi I, Sonoda J, Sakamoto E, Katahira Y, Hasegawa H, Watanabe A, Furusaka Y, Xu M, Yoneto T, Sakaguchi N, Terai K, Yamashita K, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 114(1) ページ: 34-47
  • DOI: 10.1111/cas.15542
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 化学物質が誘発する自己免疫性白斑症の発症機序とその予測 (2024)
  • 著者名/発表者名: 善本隆之
  • 学会等名: 東京医科大学・医総研Annual Meeting 2023
• [学会発表] 呼吸器と皮膚感作性物質の識別を可能にするTh2細胞株を応用した改良版2ステップDC/T共培養系の開発 (2023)
  • 著者名/発表者名: 溝口 出、片平泰弘、長谷川英哲、渡邉有麻、関根碧水、園田寿樹心、山岸美宇、善本隆之
  • 学会等名: 第36回日本動物実験代替法学会
• [学会発表] インターフェロン誘導機能を持つアデノウイルス由来の小分子核酸「VA-RNA」の細胞外小胞によるデリバリーとその抗腫瘍効果 (2023)
  • 著者名/発表者名: 小山義之、溝口 出、善本隆之、伊藤智子
  • 学会等名: 第39回日本DDS学会学術集会
• [学会発表] イミキモド誘導性乾癬モデルにおけるストレス応答性MAPキナーゼASK1の役割とその作用機序 (2023)
  • 著者名/発表者名: 長谷川英哲、渡邉有麻、溝口 出、片平泰弘、関根碧水、山岸美宇、園田寿希心、宮川聡美、前田龍郎、原田和俊、大久保ゆかり、善本隆之
  • 学会等名: 第38回日本乾癬学会総会・学術大会
• [学会発表] 生体組織接着性ポリアクリル酸／ポリビニルピロリドン複合体の形成挙動とその臨床応用 (2023)
  • 著者名/発表者名: 伊藤智子、中村賢一、大内彩歌、片平泰弘、長谷川英哲、溝口 出、善本隆之、小山義之
  • 学会等名: 第45回日本バイオマテリアル学会