| 研究課題/領域番号 |
21K14999
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| 研究機関 | 岐阜薬科大学 |
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研究代表者 |
大津 航 岐阜薬科大学, 薬学部, 特任講師 (50843091)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 分泌小胞 / 視細胞 / 網膜変性疾患 / ライソゾーム / 光障害 |
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| 研究実績の概要 |
加齢黄斑変性は、加齢とともに黄斑の障害が不可逆的に進行し失明に至る網膜変性疾患である。世界的な高齢化傾向に伴い増加傾向にあるが、特に萎縮型とよばれるタイプでは有効な治療がないため、治療薬の開発が大きな課題となっている。申請者はプラスミドDNAを用いたマウスの錐体細胞優位に遺伝子導入する技術を開発し、視細胞における後期エンドソームの機能と役割を明らかにしてきた。後期エンドソームは多胞体とも呼ばれ、他の細胞への情報伝達を担っている細胞外小胞形成の場である。網膜の視細胞の特に外節の基部では多数の細胞外小胞が観察されることが古くから知られている一方で、これらの細胞外小胞の役割については多くは明らかになっていない。本研究では、網膜、特に視細胞における細胞外小胞の役割とそれらの分子基盤の解明を目的とする。当該年度は、細胞外小胞マーカーとして知られるテトラスパニン、CD63を基にしたレポーターを発現するプラスミドを作製し、マウス網膜由来細胞である661W細胞に発現させ、その分布を観察した。さらにin vivoの遺伝子導入技術を用いマウスの視細胞に発現にさせ、その分布を観察した。発現させたCD63レポーターは視細胞特異的テトラスパニンであるペリフェリン2とは異なる分布を示した。今後はこれらの作製したコンストラクトを用いて実験を実施し、細胞外小胞由来の成分について明らかにし、病態と関連する臨床応用可能なバイオマーカーの探索を試みる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
作製したプラスミドベクターを用いマウスに遺伝子導入し、網膜におけるレポーターの発現について免疫組織染色で確認し、その分布を明らかにした。当初の計画通り細胞外小胞を分離しその性状を解析を実施しているが、当該年度中に完了することが出来なかったため、次年度も引き続き実験を継続する。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度中に終えることがが出来なかった細胞外小胞の解析を実施する。その後、レポーターの細胞外領域に付加したタグによる分離・精製の手法を確立し、錐体細胞由来の細胞外小胞が検出可能かについて検証する。得られた画分のタンパク質の発現解析を実施し、視細胞特異的な内因性マーカータンパク質を同定する。遺伝子導入したマウスに対し、プラスミド共発現による遺伝子発現抑制や変異体発現などの処置を加え、網膜の組織学的解析を実施し、細胞外小胞の役割について明らかにしていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
購入予定の試薬の納期が年度内に間に合わなかったため、次年度に繰り越した。繰り越し分は翌年度に改めて発注し、予定試薬の購入にあてる。
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