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本研究の目的は移動期の始原生殖細胞とその周辺環境を構成する細胞の詳細な遺伝子発現解析をすることである。これまで、この目的を達成すべく、均一な培養細胞(ES細胞)や生殖細胞である卵母細胞、及び卵巣の固定染色切片を用い、組織切片中の１細胞をレーザーで切り出し詳細な遺伝子発現を解析することのできる手法の開発を進めてきた。本年度は、上記手法をアーカイブ化された組織にも対応できるようホルマリン固定した組織やFFPEサンプルにも対応させ、その手法の精度評価を行い、ホルマリン固定した卵巣の組織切片からも、効率的にRNAを溶出し高い精度でトランスクリプトーム解析ができることを確認した。また、一般的な空間的トランスクリプトーム解析手法とは異なり、卵巣内の標的とした卵母細胞のスプライシングバリアントの検出が可能であることも確認した。さらに、細胞の形態的な情報である卵巣内における卵母細胞の大きさを卵母細胞の成熟の指標とし、これと転写プロファイルを比較することで、トランスクリプトームレベルで成熟が遅れていると考えられる卵母細胞を検出することに成功した。加えて、卵母細胞に隣接又は非隣接の顆粒膜細胞間で転写状態の異なる遺伝子を同定することができた。これらのことから、生体内における移動期の始原生殖細胞とその周辺の細胞で単一細胞レベルの詳細な遺伝子発現解析をするための十分な基盤技術を整えることができたと考え、ここまでの手法や解析内容を論文として報告した。現在進行中、今後の研究の展開として、本研究の最終的な解析標的である移動期の始原生殖細胞とその周辺環境を構成する細胞の詳細な遺伝子発現解析や、全能性の根源である生体内卵巣における卵母細胞の品質管理の分子基盤についての解析を行っている。
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