| 研究課題/領域番号 |
21K16198
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| 研究機関 | 金沢医科大学 |
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研究代表者 |
林 憲史 金沢医科大学, 医学部, 講師 (30639208)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | ポドサイト細胞骨格 |
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| 研究実績の概要 |
ヒトおよびマウスの腎臓を使用した免疫染色でFAM114A1はポドサイト特異的に発現していることが、FAM114A1は主にポドサイトの一次突起と細胞体に局在することがI示された。また、ヒト膜性腎症とラットハイマン腎炎（PHN）でFAM114A1の発現がタンパク質レベルで増加しているかどうかを調べるために、染色強度を比較検討したところ、ヒト膜性腎症およびラットPHNモデルでは、FAM114A1の発現が増加していることがわかった。
さらにヒト不死化ポドサイト培養細胞を用いた免疫染色で細胞内での局在を解析したところ、F-アクチンや接着分子であるパキシリンと共局在していることがわじゃる、FAM114A1はポドサイトで細胞骨格関連蛋白質として機能している可能性が示唆された。このためポドサイト細胞にsiRNAを導入してFAM114A1をノックダウンし機能解析を行ったところ、ポドサイトの細胞骨格の発達、ポドサイトの遊走、細胞の接着が阻害された。最後に、相互作用タンパク質を検出するために、FAM114A1-3XFLAGタンパク質とヒト糸球体抽出物を用いてアフィニティープルダウンアッセイを実施したところ、関連候補蛋白質としてCytoskeleton associated protein4(CKAP4)やTalin1などの細胞骨格関連蛋白質と相互作用している可能性が示唆された。結論として、FAM114A1はポドサイトの細胞骨格に関連するタンパクであることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
腎臓組織を用いた局在解析と培養細胞を用いた機能解析は順調に進んでいる。
現在はノックアウトマウスを用いた実験の準備を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度はFAM114A1ノックアウトマウスの解析に着手する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ノックアウトマウス作成に使用する予定であった経費が、マウス作成進捗状況の遅れにより今年度では使用せず、次年度に持ち越しとなった。
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