2022 年度実施状況報告書

悪性黒色腫の病態に関わるdermokineの役割の解明

研究課題

研究課題/領域番号	21K16206
研究機関	福井大学
研究代表者	宇都宮慧福井大学, 学術研究院医学系部門, 特別研究員 (20792104)
研究期間 (年度)	2021-04-01 – 2024-03-31
キーワード	デルモカイン / 悪性黒色腫
研究実績の概要	本研究では、申請者らが角化異常症や炎症性皮膚疾患において検討を進めてきた上皮細胞の分化と抗炎症作用を併せ持つ分泌蛋白デルモカインに着目して実験を進めている。DMKNは黒色腫の病態において、細胞増殖能や腫瘍免疫、上皮間葉転換を介して増殖、転移に関与していると推定され、本研究ではさらに詳細なメカニズムを解明を進めている。まずは、当教室で保存した豊富な悪性黒色腫の臨床データと組織や血清などを活用し、血清中や腫瘍周囲に発現するDMKNが、黒色腫の重症度、病勢、治療反応性を反映するバイオマーカーとしての有用性示すか解析を行った。しかし、これまでの臨床データから、悪性黒色腫患者の血清中DMKN濃度は一般的に総じて低く、高値の患者がいても皮膚炎などと合併していることが多く、悪性黒色腫の重症度、病勢など相関している証拠はまだ得られていない。また、現在、血中DMKN濃度と治療反応性の相関に注目して解析を行っている。同時、臨床病理標本のDMKN免染を進めており、病理DMKNと悪性黒色腫に相関があるのか解析を進めている。また、マウスモデルの実験も進めており、F10メラノーマ細胞の皮下投与系、肺転移系でDMKN KOマウスで、有意に増殖能、転移能の抑制がみられた。現在、マウスDMKNa蛋白の精製を行っており、まずは細胞培養系に使用する予定である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由当科で新たに精製したDMKNα蛋白質の投与量の条件設定に時間がかかっている。
今後の研究の推進方策	1. 血中および黒色腫周囲の組織中のDMKN発現量と、臨床所見・経過のパラメーター（局所浸潤、病型、遠隔転移の有無、治療反応性など）との相関関係の評価当施設で加療した黒色腫患者の血清中DMKN濃度をELISA法で定量化する。また、皮膚生検検体や病変部の切除標本を使用し、黒色腫細胞と周囲組織の免疫組織染色でDMKN発現の局在の変化を確認する。①腫瘍巣と周囲組織のDMKNの発現量の差、②付随する遺伝子発現の変化を、マイクロアレイやリアルタイムRT-PCRで網羅的かつ定量的に解析し、これらの結果と、臨床所見、局所浸潤や遠隔転移の有無、治療反応性との相関を評価する。２. DMKN欠損マウスへの皮下および尾静脈よりB16F10黒色腫細胞株を接種し、野生型と比較してDMKNの有無がin vivoにおける黒色腫の担癌状態や転移能に与える影響について評価する。原発巣や転移巣の腫瘍径、腫瘍の増大速度や浸潤性、転移能力を比較し、生存率や周囲組織における浸潤細胞の性状などを比較する。CD8陽性T細胞やNK細胞、腫瘍関連抗原の認識を含めた一連の抗腫瘍免疫作用を担う細胞の浸潤を免疫染色法やFACSで検討する。さらに、上皮間葉転換と関連した転写因子の発現に関して、リアルタイムRT-PCR法・ウエスタンブロット法を用いて評価する。３．野生型DMKN欠損マウスを使用した黒色腫細胞の皮下投与モデルに、DMKNのリコンビナント蛋白を局所・全身投与し、腫瘍組織や生存率にもたらす影響について評価する。また、DMKN過剰発現マウスに経皮・経静脈的に腫瘍細胞を投与し、腫瘍径、腫瘍の増大速度、局所浸潤性、生存率や腫瘍細胞や周囲組織における浸潤細胞の性状などを比較する。加えて、上皮間葉転換に関するsnail, zeb, twistなどの転写因子の発現に関して評価する。