| 研究課題/領域番号 |
21K16337
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
加納 麻弓子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教 (20868129)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 副甲状腺 / 胚盤胞補完法 / ES細胞 |
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| 研究実績の概要 |
令和3年度は【副甲状腺欠損マウス体内でマウスES細胞由来の副甲状腺を作製】を目標に実験を進めた。まず、マウスでは同定が難しい副甲状腺を蛍光標識するために、副甲状腺特異的に発現するPthとtdTomatoとを2Aペプチドにより連結したPth-tdTomatoレポーターマウスES細胞株の開発を行った。樹立したいくつかのクローンから、キメラ形成能の高いものを選出した。CRISPR／Cas9法により得られたGcm2-/-マウス胚にPth-tdTomatoレポーターマウス
ES細胞を顕微注入した。組織学的所見から、得られたキメラマウスの副甲状腺は完全にドナーであるPth－tdTomatoレポーターマウスES細胞由来であることが分かった。Pth－tdTomatoレポーターマウスES細胞によって補完されたGcm2-/-マウスは大部分(90％以上の個体)が正常に成体まで発育し、低カルシウム血症などの副甲状腺機能低下症を来たすことはなかった。また、重炭酸ナトリウムを用いた副甲状腺分泌刺激試験の結果、マウスES細胞由来の副甲状腺は低カルシウム刺激に応じてPTHを分泌し、機能的な内分泌器官であることが示された。続いて、次年度の移植実験に向けて、副甲状腺機能低下症モデルマウスの作出に取り組んだ。Pth-tdTomatoレポーターマウスを用い、蛍光下で副甲状腺を摘出したところ、低カルシウム血症およびPTH分泌不全を認めた。この結果から臨床上最も問題となる術後副甲状腺機能低下症を再現する、副甲状腺機能低下症モデルマウスの作出に成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度の実験計画の通り、同種間での胚盤胞補完法の成功した。さらに、生まれてきたキメラマウスの副甲状腺機能の解析も終えた。今後は副甲状腺機能低下症モデルへの移植実験ならびにマウスとラットでの異種間胚盤胞補完法とその機能解析を予定している。
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| 今後の研究の推進方策 |
来年度は副甲状腺機能不全マウスへの移植により、作製した副甲状腺の機能を評価する。さらに、ラット胚を用いたGcm2ノックアウト作製にも取り組む。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
COVID19の蔓延により予想外に納期が遅れたため。
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