| 研究課題/領域番号 |
21K16387
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
高橋 信博 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (40627139)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 肝芽腫 / インドシアニングリーン / トランスポーター / CRISPR / レンチウイルス |
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| 研究実績の概要 |
本研究は小児肝がんである肝芽腫においてインドシアニングリーン(ICG)排出が遅延する性質を有することから肝芽腫細胞において排出トランスポーターの発現が低下していると想定され、既知の薬剤から肝芽腫細胞のICG代謝に関わるトランスポーターで排出される薬剤を抽出し、肝芽腫細胞に対する代謝を検討することで、再発転移肝芽腫に対する新規治療薬を提唱することを目的としている。研究の概要としては1)トランスポーターの遺伝子ノックアウト細胞株の樹立、2)樹立した細胞株において既存薬剤によるスクリーニングによる候補薬剤の選定、3)候補薬剤のIn vitro、In vivoにおける検証である。
2021年度の成果としては、排出トランスポーターであるABCB11に着目し、肝芽腫細胞株であるHepG2においてCRISPRレンチウイルスを用いてABCB11のノックアウト細胞株を作成した。今後の薬剤スクリーニングのためにシングルセルクローニングを進行中である。また、顕微鏡におけるICG取り込みの評価法の確立を行った。ポジティブコントロールとして肝細胞癌の細胞株であるHuH7を用いることができるのではないかと想定し、同細胞株の機能解析を行った。
2021年度はほかに薬剤スクリーニングのための増殖アッセイの条件検討、動物実験の準備を行った。2021年度はシングルセルクローンを樹立した上でその細胞を用いて、ICG取り込みの検証や薬剤スクリーニングを行っていく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2021年度は薬剤スクリーニングの材料となる細胞の樹立を目標としており、遺伝子ノックアウト後、シングルセルクローニングを実施中である。タンパク質発現の解析に難渋し、条件検討のために予定よりもやや遅れている。また、2022年度で薬剤スクリーニングを行うために増殖アッセイの予備検討についても行ったが、概ね完了した。
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| 今後の研究の推進方策 |
2022年度はシングルセルクローンの樹立を急ぐとともに薬剤スクリーニングを進めていく。また、動物実験における予備検討を始めていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究計画に遅れが生じており、薬剤スクリーニングで使用するための金額が計上されていないため、また動物実験についても準備段階であり、2022年度に使用するため。
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