| 研究課題/領域番号 |
21K16487
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| 研究機関 | 公益財団法人田附興風会 |
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研究代表者 |
奥知 慶久 公益財団法人田附興風会, 医学研究所 腫瘍研究部, 研究員 (50852422)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 大腸癌 / 腫瘍発生 / 予防薬 / ヒトオルガノイド / 遺伝子発現解析 |
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| 研究実績の概要 |
申請者は大腸癌発生の土壌となる遺伝子変化についての研究を進めている。申請者は先行研究において、大腸癌に至る前の、未だ良性の段階にある前癌病変においてすでに発現が上昇あるいは低下している遺伝子群を同定しており、それらをヒト大腸癌サンプルにおいて解析するために臨床検体の収集を行っている。昨年から10例以上のサンプル収集を進めており、現時点で40例のサンプル収集および保管が完了するに至っている。
それらからCTOS法によりオルガノイドを樹立することにも成功し、徐々に成功率も上がってきている。それら樹立したオルガノイドを使用して、先行研究において同定していた遺伝子群の発現量のチェックをqPCRにて行っており、一部の遺伝子に発現変化が確認できてきている。
また、樹立したオルガノイドの免疫染色も可能となってきており、より進行した癌から樹立したオルガノイドにて間葉系細胞のマーカーが強く発現していることが判明し、EMTの一つの証拠と考えられる。今後さらに染色できる抗体の条件検討を行っていく予定としている。
実際には予定よりも研究の進捗は遅れており、その原因の一つとしてオルガノイド培養の試薬がメーカーからの供給不足や停止により半年弱に渡って困難な状況になっていたことがあげられる。
RNA seqによる遺伝子発現解析をすすめる予定としていたが、腫瘍細胞に対するコントロールとして使用する正常腸管粘膜からの培養系の樹立がまだうまくいっておらず、RNA seqによる網羅的な解析を行うにはいたっていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ヒト大腸癌の臨床検体収集に関しては昨年度同様概ね順調に進んでおり、オルガノイドの樹立・培養系の確立、さらにRNA抽出、免疫染色による発現チェックなど、概ね進んでいる部分もあるが、メーカーからの試薬供給不足・停止などにより当初の計画よりやや遅延していると判断している。
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| 今後の研究の推進方策 |
いまだオルガノイド培養試薬の供給が不安定であるため不透明な部分があるが、現在のオルガノイド培養系をさらに拡大し、遺伝子変異との関係を探る方向で検討している。具体的にはKRAS wild/mutationによって遺伝子の発現量に違いが出てきている可能性がある。また、現在徐々に腫瘍細胞からのオルガノイド樹立の成功率は上昇してきているが、正常腸管粘膜からもオルガノイド樹立ができないか確認が必要である。RNA seqによる遺伝子発現の網羅的な解析を行うためにもコントロールとするサンプルが重要であり、そのためには正常腸管粘膜からの培養系の確立も喫緊の課題と考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
一つ目に、コロナ禍のために予定していた学会への現地参加などがなかったことから今年度も昨年度に引き続き旅費の支出がなかったことがあげられる。二つ目として、メーカーからの試薬供給不安定により予定していた試薬購入ができなかったため支出が予定よりも少なくなり、次年度に持ち越しとなった。来年度は供給が安定することを期待している。
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