多血小板血漿(PRP)上清(PRPr)の作成:New Zealand White Rabbit16週の雌を用いて作成を行った。3匹の家兎を使用した予備実験により最適な採血方法、PRPr作成方法を検討した。下大静脈より採血を行い、25mlの血液を採取し、純度の高いPRP(13.5倍)を作製し、PRPrを得た。末梢血赤血球4.7x106/ul、白血球2.5x103/ul、血小板233x103/ulに対して作成したPRPは赤血球0.00x106/ul、白血球0.00x103/ul、血小板3157x103/ulであった。 動物実験:初回手術(chondroitinase ABC: CABCの椎間板内注入)にてNew Zealand White Rabbit16週の雌を11匹使用した。全身麻酔下に手術は左側大転子より3横指頭側、正中棘突起より2横指外側に3横指程度の皮膚切開を行い、筋膜を切開した。筋間を鈍的に剥離し、一部軟部を切開して椎間板左側を露出した。透視下にレベルを確認し、L2/3、L4/5にCABC(1.25単位/ml)をIto micro syringe (25ul)、Micro needleを用いて10ul注入した。筋層、皮下を縫合し閉創した。二回目手術(PRPrもしくは生理食塩水:生食の椎間板内注入)は初回手術より4週間後に行い、L2/3、L4/5にPRPrもしくは生食をランダムに注入した。16週で屠殺した。 X線評価による椎間板高の推移:CABC注入によりコントロール群であるL3/4と比べてまた、同レベルで注射前と比べて有意に椎間板高は減少した(平均55%)。生食群と、PRPr群両方で椎間板高は継続的に回復したが、PRPr群は生食群より有意に改善していた。16週の時点で生食群は95%まで回復し、PRPr群は76%まで回復した。
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