| 研究課題/領域番号 |
21K16779
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| 研究機関 | 大阪医科薬科大学 |
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研究代表者 |
中村 奈津穂 大阪医科薬科大学, 医学部, 助教 (10869754)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | miRNA / 子宮内膜症性卵巣嚢胞 / 卵巣癌 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、子宮内膜症性卵巣嚢胞および子宮内膜症関連卵巣癌におけるmiR-486-5pの機能を明らかにするために、miR-486-5pの標的遺伝子と関連する経路をPathway解析やルシフェラーゼレポーターアッセイなどの手法を用いることで機能とそのメカニズムを明らかにすることを目的としている。
令和3年度においては、まず、miRNA機能推定解析を行うため、filgen biosciences & nanosciencesに依頼し、miR-486-5pの Pathway解析を行った。その後、TargetScanHuman7.2のデータベースを使用し、miR-486-5pのターゲットと推定される遺伝子のリスト、およびそれらの遺伝子が関連するPathwayを明らかにし、標的遺伝子の特定:Pathway解析により明らかになった標的遺伝子のリストから、子宮内膜症性卵巣嚢胞および子宮内膜症関連卵巣癌に関与していると考えられる標的遺伝子を特定を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
新型コロナウィルス感染症の影響などで物品の輸入などが予定より遅れたため
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、以下の項目の検討を行なっていく。
・標的遺伝子発現量の解析：標的遺伝子の発現差を確認するため、以前の報告で使用した大阪医科大学附属病院で手術時に採取した子宮内膜症性卵巣嚢胞 34例、子宮内膜症関連卵巣癌 7例の血清を用い、qRT-PCRを行い標的遺伝子の発現量を解析する。
・標的遺伝子の検証：miRNA機能推定解析により決定した標的遺伝子をさらに検証する。ルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、miR-486-5pが標的遺伝子に直接結合することを確認する。
・標的遺伝子の発現量比較：不死化子宮内膜症上皮細胞株(EMOsis cc/TERT)を用い、miR- 486-5pのPre-miR miRNA PrecursorおよびmiRNA inhibitorを用いて過剰発現および発現抑制させる。qRT-PCR、Western blottingを行い、過剰発現および発現抑制した細胞株とコントロール群における標的遺伝子の発現量を比較する。
・増殖能の検討：不死化子宮内膜症上皮細胞株(EMOsis cc/TERT)を用いて、標的遺伝子を過剰発現および発現抑制させ、Proliferation assayを行う。CellTiter 96 AQuenous (MTS) One Solution Reagentを使用し、吸光度を測定する。コントロール群と比較し、増殖能を検討する。
・侵潤能の検討：同様に、標的遺伝子を過剰発現および発現抑制させた不死化子宮内膜症上 皮細胞株(EMOsis cc/TERT)に、Wound-healing assayを行い、創閉鎖率をコントロール群と比較し、浸潤能を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウィルス感染症の影響等で実験計画に少し遅れが生じているため次年度使用額が生じた。次年度は標的遺伝子発現量の解析や検証などを行うため、その費用に使用する予定である。
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