| 研究課題/領域番号 |
21K16956
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
近藤 智豊 (平賀智豊) 東京歯科大学, 歯学部, 助教 (60733590)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 細胞外小胞 / 唾液 / リキッドバイオプシー / 口腔がん |
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| 研究実績の概要 |
エクソソームに代表される細胞外分泌小胞(Extracellular vesicle, EV)はあらゆる細胞から分泌されており、その大きさ、放出機構は多様性に富んでいる。 現 在、癌の微小環境形成、薬剤耐性獲得、免疫療法の制御などの分子機構を語る上でEVは欠くことできない因子となっている。このような潮流の中、EVを活用し た、新しい癌の診断法、治療法の確立が期待されている。これまでに、健常者の唾液が含む「小さなEV(≒エクソソーム)」と「大きなEV」を分けて解析すること から、大きなEVは小さなEVとは異なる分子群が運ばれていることを見出してきた。 本研究ではこの知見を発展させ、口腔扁平上皮癌患者(OSCC)の唾液に含まれ る、予後に関連したマーカー分子がどのEV分画に含まれているかを整理し、EVの大き さ情報も加味した、低侵襲で操作の簡便な新しいOSCC予後診断システムの 確立につなげる。 昨年度は、唾液を「大きなEV」「小さなEV」「さらに小さな可溶性分子」を含む3つの分画に差分遠心法で分け、それぞれのEV分画に対して マーカー解析を行った。これら3分画にOSCCとの関連が報告されているEGFRが、各分画で特異的なパターンで濃縮していることを確認した。今年度はOSCC切除検体 でのEGFR発現を免疫 組織学的に評価を中心に実施した。その結果、唾液3分画において様々なEGFR発現パターンがあるのと同様に、組織でのEGFR発現パターンも異なることがわかった。また、一部の予後不良症例では細胞内に顆粒状にEGFRが発現しており、 EGFR陽性細胞外小胞を含んでいる可能性が示唆された。
来年度は、EGFR陽性EVの生化学的、分子生物学的特徴をさらに調査し、OSCCの進行とどのように関連するかを明らかとする。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
OSCC切除検体と唾液含有EVsでのEGFR発現を比較解析するに際し、ペアでのサンプリングが困難なケースが生じた。また、頸部リンパ節転移を伴う症例では唾液、組織ともにEGFR発現分布が異なることが示唆されたため、EGFR陽性EVの生化学的、分子生物学的特徴の調査を計画した。しかしながら、プロテオーム解析およびシークエンス解析の業務委託を行うにあたり、予算より高額であるため解析方法の見直しを要した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、切除検体と唾液の両サンプル数を増やし調査を進めていく。また、唾液由来細胞外小胞でのEGFR発現分布については早期癌へ対象を拡大し解析を行う。また、EGFR陽性EVを 単離し、in vitro実験を通してがんの浸潤・転移のメカニズムでの機能役割について調査を行う。 臨床実装できる診断法を確立するために、超遠心ではなく フィルターを用いたEV分画法と、上記マーカー解析を組み合わせる事で、操作の迅速化・簡便化を図 る。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
・事前調査に想定以上の時間を要した。
・唾液を3分画化し、口腔がんの治療ターゲットとされている上皮成長因子EGFRの発現を調査したところ、口腔がん患者由来の唾液3分画には健常者とは異なる特 異的なパターンでEGFRが発現していることが判明した。そのため、唾液で発現しているEGFRの分子生化学的特徴を調査することを目的として口腔がん細胞株を用 いたin vitro実験を行う必要が生じた。
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